"МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ. ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ. ГОСТ ИСО 7218-2011" (утв. Приказом Ростехрегулирования от 13.12.2011 N 1477-ст)
10.3 Обработка результатов, полученных на плотных средах
10.3.1 Подсчет колоний
После термостатирования, установленного соответствующим стандартом на конкретный метод испытания, подсчитывают количество колоний (общее число колоний, число типичных колоний или предполагаемых колоний) на каждой чашке, содержащей менее 300 колоний (или другого количества, установленного соответствующим стандартом на конкретный метод испытания).
При подсчете типичных или предполагаемых колоний необходимо представить описание колоний, которое дано в соответствующем стандарте на конкретный метод испытания.
В определенных случаях подсчет колоний может быть затруднен (например, когда присутствуют распространяющие "ползучий рост" микроорганизмы). Такие сливные колонии рассматривают как отдельные колонии. Если менее четверти чашки заполнено таким сливным ростом, колонии подсчитывают на другой части чашки и рассчитывают по их количеству общее количество колоний в чашке. Посредством интерполяции выводится теоретическое число, которое должно соответствовать числу микроорганизмов на всей чашке. Если сливной рост отмечается более чем на одной четверти чашки, то подсчет на такой чашке не проводится. Колонии сливных (распространяющихся) микроорганизмов, выросших в форме цепочек, рассматривают как одну колонию.
В различных методах расчетов, приведенных в 10.3.2. необходимо принять во внимание чашки, не содержащие колоний, если такие чашки имеются.
При использовании спирального дозатора подсчет колоний проводят в соответствии с 10.2.4.3.3.
10.3.2 Обработка результатов10.3.2.1 Общие положения
10.3.2.1.1 В этом подразделе рассматриваются общие случаи:
- посев проводят на одной чашке Петри диаметром 90 мм для каждого разведения;
- максимальное количество всех присутствующих колоний на чашке составляет 300;
- максимальное общее число колоний (типичных и атипичных), присутствующих на чашке, при подсчете типичных или презумптивных колоний приблизительно равно 300 на чашку:
- максимальное число колоний для презумптивных колоний равно 150 на чашку;
- число презумптивных колоний, посеянных для идентификации или подтверждения (см. 10.3.2.3), в каждой выбранной чашке обычно 5.
Такие цифры определены в соответствующих стандартах на конкретный метод испытания.
Если используются чашки с другим диаметром, отличным от 90 мм, максимальное число колоний должно возрастать или уменьшаться пропорционально площади поверхности чашки (или мембраны).
10.3.2.1.2 Методы расчета, приведенные ниже, применяются для тех случаев, которые встречаются наиболее часто, когда испытания проводятся в соответствии с установившейся лабораторной практикой. Могут встречаться особые случаи (например, отношение коэффициентов разведения, использованное для двух последующих разведений, может заметно отличаться), и именно поэтому необходимо, чтобы полученные результаты подсчета изучал и трактовал квалифицированный микробиологии, при необходимости, не учитывал недостоверные результаты.
10.3.2.2 Метод расчета: общий случай (подсчет общего количества колоний или типичных колоний). Для получения достоверного результата при подсчете колоний обычно считается необходимым, что бы хотя бы в одной чашке содержалось не менее 10 колоний [общее число колоний, типичных колоний или колоний, соответствующих критериям идентификации (см. 10.3.2.3)].
Рассчитывают число N микроорганизмов, присутствующих в пробе, как средневзвешенное значение из двух подсчетов последовательных разведений по формуле
где 
C - сумма колоний, подсчитанных на двух чашках, выбранных для подсчета из двух последовательных разведений, в которых хотя бы одна чашка содержит не менее 10 колоний:
V - обьем посевного материала, внесенного в каждую чашку, см3;
d - коэффициент разведения, соответствующий первому выбранному разведению [d = 1, если выбран только неразведенный жидкий продукт (испытуемая проба без разбавления)].
Результат вычисления округляют до двух значащих цифр. Если третья цифра меньше пяти, предшествующую цифру не изменяют, если третья цифра больше или равна пяти, увеличивают предшествующую цифру на единицу.
Результат выражают предпочтительно как число от 1,0 до 9,9, умноженное на 10 в соответствующей степени, или целым числом, состоящим из двух значащих цифр.
За результат принимают количество N микроорганизмов на миллилитр (жидких продуктов) или на грамм (прочих продуктов).
Пример - Подсчет дал следующие результаты:
- в первой выбранном разведении (10^(-2)) 168 колоний:
- во втором выбранном разведении (10'^(-3)) 14 колоний.
Выполнив округление результатов в соответствии с вышеописанным, получаем число микроорганизмов, равное 17000 или 1,7 х 10^(-3) на миллилитр или на грамм продукта.
10.3.2.3 Метод вычисления:
после проведения идентификации
если используемый метод требует идентификации, определенное количество А предполагаемых колоний (обычно пять) пересеивают с каждой чашки, отобранной для подсчета колоний. После идентификации рассчитывают для каждой чашки число а колоний, соответствующих критерию идентификации, по формуле
где b - число колоний, соответствующих критериям идентификации, среди идентифицированных колоний А.
С - общее число предполагаемых колоний, подсчитанных в чашке.
Результат вычисления округляют до целого числа. Для этого, если первая цифра после запятой меньше пяти, предшествующую цифру не изменяют, если первая цифра после запятой больше или равна пяти, предшествующую цифру увеличивают на единицу.
Количество N идентифицированных микроорганизмов, присутствующих в испытуемой пробе, рассчитывают путем подстановки вместо С значения a в формулу, приведенную в 10.3.2.2.
Полученный результат округляют е соответствии с 10.3.2.2.
Результат выражают в соответствии с 10.3.2.2.
Пример - Подсчет дал следующие результаты:
- в первом разведении (10^(-3)): 66 колоний:
- во втором разведении (10^(-4)): 4 колонии.
Тестирование отобранных колоний было выполнено следующим образом:
- из чашки с 66 колониями для идентификации было отобрано восемь колоний, из которых шесть колоний соответствовали критериям, следовательно, а = 50:
- из чашки с четырьмя колониями все четыре соответствовали критериям, следовательно, а = 4.
Округление результата выполняют в соответствии с 10.3.2.2, количество микроорганизмов в пробе составило 49000 или 4,9 х 10^(4) на миллилитр или на грамм продукта.
10.3.2.4 Метод вычисления: малые количества
10.3.2.4.1 Одна чашка (анализируемой пробы или исходной суспензии или первого разведения) содержит менее десяти колоний.
Число микроорганизмов от десяти до значения верхнего предела каждого метода находится в диапазоне оптимальной точности. Однако точность быстро уменьшается по мере уменьшения числа колоний менее десяти. В зависимости от цели анализа нижний предел можно определить в соответствии с представленным ниже для количеств менее десяти.
Согласно ISO 13843 определение предела обнаружения будет таким: "Наименьшая средняя концентрация частиц х в образце для анализа (навеске), если ожидаемая относительная стандартная неопределенность равна установленному значению (RSD)".
RSD - это относительное квадратное отклонение, которое вычисляют путем деления стандартного отклонения s для популяции образца на среднее х для этого образца. Вместо RSD для относительного стандартного отклонения будет использовано обозначение w. Таким образом, 
В случае распределения Пуассона х вычисляют по формуле
Если w установлено при 50 % как предел приемлемой относительной точности (которая считается разумной в микробиологии), нижний предел определения будет при числе колоний, вычисляемых по формуле
Таким образом, результаты, основанные на количестве меньше четырех, следует оценивать как простое выявление присутствия искомого микроорганизма.
Вывод: если в чашке содержится менее десяти колоний, но не менее четырех, результат вычисляют по методу для общего случая (10.3.2.2) и принимают за результат вычисленное количество микроорганизмов х на см3 (для жидких продуктов) или на грамм продукта (для прочих продуктов).
Если общее число составит от одного до трех, точность результата будет слишком низкой, и результат необходимо сообщать следующим образом:
- "Микроорганизмы присутствуют в количестве менее чем (4 х d) на грамм или см3".
10.3.2.4.2 Чашка (анализируемый образец или исходная суспензия или первое разведение) не содержит колоний.
Если чашка с анализируемой пробой (для жидких продуктов) или исходной суспензией (для прочих продуктов) или отобранная из чашек, засеянных материалом первого разведения, не содержит колоний, результат сообщают следующим образом: "Менее 1 / d микроорганизмов на см3" (для жидких продуктов) или "менее 1 / d микроорганизмов на грамм" (для прочих продуктов).
где d - коэффициент разбавления исходной суспензии или первого засеянного или отобранного разведения (d = 10° = 1, если отбирается непосредственно посеянная анализируемая проба жидкого продукта).
10.3.2.4.3 Особые случаи
10.3.2.4.3.1 Общие положения
Эти случаи касаются подсчета типичных и предполагаемых колоний.
10.3.2.4.3.2 Случай 1
Если число типичных и атипичных колоний для чашки с первым разведением d_1, превышает 300 (или какое-либо другое число, установленное в соответствующем стандарте на конкретный метод испытания) с выявленными типичными колониями или подтвержденными колониями и если чашка, содержащая последующее разведение d_2. содержит менее 300 колоний (или меньше любого другого числа, оговоренного в соответствующем стандарте) и не наблюдается типичных или подтвержденных колоний, результат сообщают следующим образом: "Менее 1 / d, и более 1 / d, микроорганизмов на см3" (для жидких продуктов) или "менее 1 / d_2 и более 1 / d_1, микроорганизмов на г" (для прочих продуктов).
где d_1, и d_2,. - коэффициенты разбавления, соответствующие разведению d_1, и d_2.
Пример - Подсчет дал следующие результаты:
- в первом выбранном разведении (10^(-2)) выявлено более 300 колоний на чашку, среди которых присутствуют типичные или подтвержденные колонии;
- во втором выбранном разведении (10^(-3)) выявлено 33 колонии, среди которых присутствуют типичные или подтвержденные колонии.
Результат в пересчете на микроорганизмы будет от 100 до1000 на см3 или на г продукта.
10.3.2.4.3.3 Случай 2
Если количество типичных и атипичных колоний в чашке с первым разведением d_1, превышает 300 (или какое-либо другое число, установленное в соответствующем стандарте), среди которых типичных или подтвержденных (идентифицированных) колоний не наблюдается, и если в чашке, содержащей последующее разведение d_2, выявлено менее 300 колоний (или какого-либо другого числа, установленного в соответствующем стандарте) и не выявлено типичных или подтвержденных (идентифицированных) колоний, результат сообщают следующим образом: "Менее М0г микроорганизмов на см3" (для жидких продуктов) или "Менее 1 \ d_2 микроорганизмов на г" (для прочих продуктов).
где d_2 - коэффициент разбавления, соответствующий разведению d_2;.
Пример - Подсчет дал следующие результаты:
- в первой выбранном разведении (10^(-2)) выявлено более 300 колоний на чашку, среди которых нет типичных или подтвержденных колоний;
- во втором выбранном разведении (10^(-3)) 33 колонии, среди которых нет типичных или подтвержденных колоний.
Результат в пересчете на микроорганизмы будет меньше 1000 на см3 или на г продукта.
10.3.2.5 Метод вычисления: особые случаи
10.3.2.5.1 Если число подсчитанных колоний (общее число колоний, число типичных колоний или число предполагаемых колоний) выше 300 (или какого-либо другого числа, установленного в соответствующем стандарте на конкретный метод испытания) для чашки с первым разведением d_1,. а число (общее, типичных колоний или колоний, соответствующих критериям идентификации) для чашки со вторым последующим разведением d_2 менее 10, то,
- если число колоний для чашки с первым разведением d_1, попадает от 334 до 300 (верхний участок доверительного интервала для средневзвешенного значения, равного 300). используют метод вычисления для общих случаев (см. 10.3.2.2):
- если число колоний на чашке с первым разведением d_1, превышает 334 (верхний предел доверительного интервала для средневзвешенного значения, равного 300). учитывают только результат подсчета для разведения d_2 и вычисляют ориентировочное число (см. 10.3.2.4), за исключением случаев, когда максимальное значение для подсчета колоний установлено на значении 300, а ориентировочное количество меньше восьми (нижний предел доверительного интервала для средневзвешенного значения, равного 10), поскольку разность между двумя разведениями будет неприемлемой.
Цифры, соответствующие доверительным интервалам, должны быть привязаны к максимальному количеству, установленному для подсчета колоний.
Пример 1 - Подсчет дал следующие результаты:
- в первом выбранном разведении (10^(-2)) выявлено 310 колоний:
- во втором выбранном разведении (10^(-3)) выявлено восемь колоний.
Используют метод вычисления для общих случаев, анализируя чашки для двух выбранных разведений.
Пример 2 - Подсчет дал следующие результаты:
- в первом выбранном разведении (10^(-2)) выявлено более 334 колоний на чашку:
- во втором выбранном разведении (10^(-3)) девять колоний.
Ориентировочное число сообщают на основе колоний, подсчитанных в чашке для разведения 10^(-3).
Пример 3 - Подсчет (если для подсчета колоний установлено максимальное количество, равное 300) дал следующие результаты:
- в первом выбранном разведении (10^(-2)) свыше 334 колоний на чашку:
- во втором выбранном разведении (10^(-3)) семь колоний. Результат данного подсчета неприемлем.
Пример 4 - Подсчет (если для подсчета колоний установлено максимальное число, равное 150) дал следующие результаты:
- в первом выбранном разведении (10^(-2)) более 167 колоний на чашку (верхний предел доверительного интервала при средневзвешенном значении, равном 150):
- во втором выбранном разведении (10^(-3)) семь колоний.
Сообщают ориентировочное количество на основе колоний, подсчитанных в чашке с разведением 10^(-3).
10.3.2.5.2 Если количество подсчитанных колоний (общее количество колоний, количество типичных колоний или количество презумптивных колоний) для каждой из чашек всех посеянных разведений дает значение свыше 300 (или любого другого числа, установленного в соответствующем стандарте), результат формулируют следующим образом: "Более 300 / d" (в случае общего числа или числа типичных колоний) или "Более 300 х b / А x 1 / d" (в случав подтвержденных (идентифицированных) колоний), выраженных в количестве микроорганизмов на см3 (для жидких продуктов) или в количестве микроорганизмов на г (для прочих продуктов).
где d - коэффициент разбавления последнего посеянного разведения;
b - число колоний, соответствующих критериям идентификации среди презумптивных колоний А.
10.3.2.5.3 Если чашка с последним засеянным разведением содержит от 10 до 300 колоний, то общее количество колоний, количество типичных колоний или количество презумптивных колоний N вычисляют по формуле
где с - число колоний, подсчитанных в чашке:
V- обьем посевного материала, использованный для каждой чашки, см3.
d - выбранное разведение (коэффициент разбавления).
Результат округляют в соответствии с 10.3.2.2.
За результат принимают число N микроорганизмов на см3 (для жидких продуктов) или на г (для прочих продуктов).
Пример - Подсчет дал следующие результаты:
- в последней засеянном разведении (10^(-4)) 120 колоний.
Округление результата проводят в соответствии с 10.3.2.2. число N микроорганизмов равно 1200000 или 1,2 х 10^5 на см3 или на г продукта.
10.3.2.6 Измерение неопределенности
См. ISO 19036 в отношении количественных определений.