"МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ. ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ. ГОСТ ИСО 7218-2011" (утв. Приказом Ростехрегулирования от 13.12.2011 N 1477-ст)
10.5.6.2 Таблицы НВЧ
10.5.6.2.1 Таблицы для одного разведения
Таблицы В.1 - В.4. приложение В, дают значения НВЧ и 95%-ные доверительные интервалы на образец для анализа для 10,15.20 и 25 параллельных пробирок (каждая пробирка засеяна материалом (одного) разведения).
Чтобы подсчитать итог на контрольную массу образца (или объем для жидких образцов), умножают НВЧ и предельные значения 95%-ного доверительного интервала на отношение (контрольная масса [масса пробы для анализа (навески)]). Нельзя умножать на логарифмическую стандартную неопределенность. За контрольную массу в микробиологических исследованиях обычно берется 1 г. Масса образца для анализа (навеска) соответствует количеству образца (в граммах), которое представлено в объеме, использованном для засева пробирок.
Двадцать пробирок с бульоном двойной крепости (концентрации) были засеяны аликвотами по 5 см3 десятикратно разбавленной пробы (0,1 г / 5 см3). После термостатирования 16 пробирок из 20 показали заметный рост. Какова была наиболее вероятная бактериальная плотность (организмов на грамм) в пробе? Таблица В. 3 дает значение 1,61 как наиболее вероятное число (НВЧ) организмов на пробирку при нижнем пределе 95%-ного доверительного интервала, равном 0,93 и верхнем пределе, равном 2.77.
В каждую пробирку было добавлено 5 см3 пробы для анализа, что соответствует 0,5 г пробы. Следовательно, наиболее вероятное число микроорганизмов в 1 г пробы будет задаваться
10.5.6.2.2 Таблицы для нескольких разведений при последовательных разведениях
Для симметричных способов обшей практикой является использование трех последовательных разведений с тремя (таблица В.5) или пятью параллельными пробирками (таблица В.7) в каждом разведении. Записывают число положительных пробирок для каждого набора пробирок и по таблице НВЧ для использованного способа посева подсчитывают наиболее вероятное число (НВЧ) микроорганизмов, присутствующих в контрольном объеме образца.
Некоторые комбинации положительных пробирок встречаются чаще, чем другие. Например, комбинация положительных пробирок 0, 0, 3 встречается гораздо реже комбинации 3, 2, 1. Чтобы выразить количественно эту вероятность, все комбинации положительных результатов классифицируют по категориям от 0 до 3. Результат категории 1 является результатом с более высокой вероятностью, тогда как результат категории 3 более редкий и его сложно воспроизвести. Наиболее худшим вариантом являются результаты категории 0; эти результаты рекомендуется принимать с большим сомнением. Предполагая, что результаты анализа верны, можно ожидать, что 95 % из наблюдаемых комбинаций попадут в категорию 1. в категорию 2 - 4 %, в категорию 3 - 0,9 % и только 0.1 % - в категорию 0. Категории поясняются в таблице В.6.
В варианте, где используется более трех разведений, выбор "правильной" комбинации трех последовательных разведений не всегда очевиден. Однако выбор можно легко сделать путем записи всех возможных комбинаций положительных пробирок и выбора соответствующей категории по таблице В.5.
После этого применяют следующие правила:
1) Выбирают комбинации трех последовательных разведений, имеющих профиль категории 1, чтобы получить индекс MPN. Если получится более одной комбинации, имеющей профиль категории 1. используют ту комбинацию, которая имеет самое большое число положительных пробирок.
2) Если не имеется комбинации, имеющей профиль категории 1. используют комбинацию, имеющую профиль категории 2. Если имеется несколько комбинаций, имеющих профиль категории 2, используют ту комбинацию, которая имеет самое большое число положительных пробирок.
3) Если не имеется комбинации, имеющей профиль категории 2. используют комбинацию, имеющую профиль категории 3. Если получено несколько комбинаций, имеющих профиль категории 3. используют ту комбинацию, которая имеет самое большое число положительных пробирок.
Некоторые примеры показаны в таблице 1.