"МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ. ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ И МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА. ГОСТ Р 54354-2011" (утв. Приказом Ростехрегулирования от 12.07.2011 N 180-ст)

8.3. Выявление и определение бактерий рода Salmonella

Подготовка к анализу, проведение и обработка результатов анализа - по ГОСТ Р 50455, ГОСТ Р 52814 с учетом разделов 4 - 7 и ниже приведенного.

Хромогенные и флюорогенные питательные среды являются питательными средами нового поколения, принцип действия которых основан на выявлении высокоспецифичных ферментов у искомых микроорганизмов. В состав этих сред входит хромогенный субстрат - вещество, при расщеплении которого ферментами, специфичными для определенного вида микроорганизмов, образуются окрашенные и/или флюоресцирующие продукты. В результате колонии искомых микроорганизмов окрашиваются в определенный цвет или приобретают способность к флюоресценции при ультрафиолетовом облучении.

В плотной хромогенной среде [11] присутствие дезоксисилата натрия ингибирует сопутствующую грамположительную микрофлору.

Посев материала на эту среду осуществляют из жидкой селективной среды. Инкубируют посевы в аэробных условиях 24 - 48 ч при температуре 35 °С - 37 °С. Обработка результатов анализа - по ГОСТ Р 50455, ГОСТ Р 52814.

Сальмонеллы при культивировании на этой хромогенной среде образуют кислоту из пропиленгликоля и под воздействием изменения индикатора рН их колонии окрашиваются в красный цвет. Хромогенный субстрат, также имеющийся в составе среды, гидролизуется ферментом -галактозидазой, продуцируемым колиформами, в результате чего колонии колиформных бактерий при росте на этой среде приобретают сине-зеленый или сине-фиолетовый цвет, а остальные энтеробактерии остаются бесцветны.

Плотные селективные хромогенные среды других типов (приложение А) для выделения и идентификации сальмонелл имеют питательную основу из нескольких видов пептонов и содержат три хромогенных субстрата, что обеспечивает рост всех штаммов Salmonella и позволяет определять их специфическую ферментативную активность. Дифференциация штаммов Salmonella, в том числе сбраживающих лактозу, от других бактерий основана на том, что продуценты эстеразы образуют розовые или розовато-лиловые колонии. Прочие бактерии образуют колонии других цветов. Селективная смесь ингибирует рост большинства грамположительных бактерий и дрожжей.

Посев материала на эту питательную среду осуществляют из жидкой селективной среды. Инкубируют посевы в аэробных условиях 18 - 24 ч при температуре 35 °С - 37 °С.

Полужидкие агаризованные среды предназначены для выявления подвижных штаммов сальмонелл, диффузный рост которых в толще этих сред проявляется от центра к периферии (ГОСТ Р 52814).

В состав питательной среды пластин (подложек) для анализа сальмонелл входят питательные вещества с добавлением хромогенного субстрата и антибиотика, например, новобиоцина. Посев пробы выполняют из среды накопления: открывают поверхностную защитную пленку пластины (подложки), затем в центр среды вносят 1 см3 материала и термостатируют при температуре 43 °С до 48 ч. При этом сальмонеллы формируют зеленые или черные колонии за счет распада хромогенного субстрата, присутствующего в среде. Среда вокруг колоний сальмонелл меняет цвет с фиолетового на желтый. При высокой концентрации колоний сальмонелл вся поверхность среды может быть желтого цвета. При выявлении на этой среде подозрительных на сальмонеллы колоний их идентифицируют по ГОСТ Р 52814.

Пластифицированные среды пластин (подложек) других типов (приложение А) могут содержать питательные вещества с добавлением хромогенного субстрата и дезоксихолата натрия, ингибирующего рост грамположительной микрофлоры. Посев пробы выполняют, как указано выше, термостатируют 24 ч при температуре 35 °С. Сальмонеллы ферментируют ксилозу и декарбоксилируют лизин до кадаверина, что сопровождается повышением рН и выделением сероводорода, который, соединяясь с железом, образует сульфит железа, придающий колониям черный цвет.

В состав пластифицированной среды подложек (пластин) для комплексного выявления сальмонелл/Enterobacteriacae входит модифицированный агар, а также субстраты X--Gal (ферментируемый -галактозидазой) и Salmon--Gal (ферментируемый -галактозидазой). Посев и термостатирование пробы выполняют, как указано выше. При инкубации сальмонеллы формируют голубые или зелено-голубые колонии, в то время как другие энтеробактерии формируют колонии пурпурного цвета.

Результаты анализа оценивают по каждой пробе отдельно.

Интерпретацию результатов анализа выявленных культур проводят по ГОСТ Р ИСО 7218.

Если культуры предположительно отнесены к бактериям рода Salmonella, то окончательную идентификацию проводят по ГОСТ Р ИСО 7218. В этом случае результаты выявления бактерий рода Salmonella выдают после получения ответа по окончательной идентификации.

Результаты анализа записывают следующим образом: "бактерии рода Salmonella обнаружены или не обнаружены в 25 см3 жидкого или 25 г сухого продукта".