"МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО САНИТАРНО - МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ ПОЧВЫ" (утв. Главным государственным санитарным врачом СССР 19.02.81 N 2293-81) (извлечение)

Количественный учет сальмонелл в почве

В основу предлагаемого метода количественного учета сальмонелл в почве положен принцип однолинейной раститровки на четыре десятикратно уменьшающихся объема по аналогии с бродильным методом определения титра кишечной палочки.

Из исследуемого почвенного образца отбирают навеску в 55,5 г, добавляют 500 мл стерильной водопроводной воды и проводят обработку для получения почвенной суспензии (в соответствии с "Методическими указаниями" 1977 г.). По 0,1 мл почвенной суспензии засевают на 3 - 5 чашек висмут - сульфитного агара, а к оставшейся суспензии добавляют растворы и навески магниевой среды по экспедиционной модификации из расчета на 500 мл. При этом происходит увеличение объема на 10%, т.е. до 550 мл. Среда тщательно перемешивается и раститровывается на 4 объема с учетом внесенных ингредиентов среды накопления на 0,5 (0,495), 5,0 (4,95), 49,5; 495. Таким образом, исследуется 500 мл почвенной суспензии, раститрованной в магниевой среде на 0,45; 4,5; 45; 450 мл, что соответствует 0,05; 0,5; 5 и 50 г почвы.

После 18 - 20 часовой инкубации в термостате при температуре 37 град. C из каждого исследуемого объема среды накопления проводят пересев петлей на 2 чашки с висмут - сульфитным агаром. Дальнейшая идентификация проводится по общепринятой методике.

Расчет индекса сальмонелл в почве. При наличии положительного результата прямого посева почвенной суспензии на висмут - сульфитный агар высчитывают среднее количество выросших колоний в 0,1 мл, что соответствует количественному содержанию (индексу) сальмонелл в г почвы.

Полученные результаты посевов из сред обогащения оценивают по экспериментально разработанной таблице, которая по соотношению положительных и отрицательных находок сальмонелл в исследуемых объемах позволяет дать количественную оценку содержания их в почве.

СХЕМА КОЛИЧЕСТВЕННОГО УЧЕТА САЛЬМОНЕЛЛ В ПОЧВЕ

Исследуемые объемы почвенной суспензии в мл (почвы в г)				Экспериментально установленные границы индексов сальмонелл (на 1 г почвы)	Рассчитанная по формуле Томаса НВЧ (наиболее вероятное число сальмонелл)
450	45	4,5	0,45
50	5	0,5	0,05
+	+	+	+	50 клеток и выше	не подвергается расчету
+	+	+	-	49 - 5	13
+	+	-	-	4 - 1	2
+	-	-	-	единичные клетки на исследуемую навеску почвы в 55,55 г	0,2

В случае получения отрицательного результата посева в большем объеме, при положительном посеве из меньшего, следует производить расчет по последнему объему, давшему положительный результат. Если рост сальмонелл обнаружен лишь в одном объеме, независимо от его величины, индекс сальмонелл в данной пробе определяется единичными клетками в исследуемой пробе почвы 55,5 г.

Прямой посев почвенной суспензии может быть заменен растиранием 0,1 - 0,5 г почвы на поверхности висмут - сульфитного агара. Количество выросших колоний сальмонелл пересчитывают на 1 г почвы.

Экспериментально установлено, что тип почвы не влияет на чувствительность метода. Предлагаемый метод апробирован в натурных условиях на сероземах, черноземах и дерново - подзолистой почве. Разработанная в экспериментальных условиях таблица количественного учета сальмонелл в почве подтверждена путем математического обсчета полученных результатов исследований (по формуле Томаса).