"ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.2218-07" (утв. Роспотребнадзором 31.05.2007)

7.2. Реактивы

а) Для определения образования индола

Реактив Эрлиха:

Парадиметиламинобензальдегид - 1,0 г

Этиловый спирт - 95,0 мл

Концентрированная соляная кислота - 20,0 мл.

Альдегид растворяют в спирте, затем добавляют кислоту, смешивают, хранят в темном месте.

Полоски фильтрованной бумаги пропитывают насыщенным раствором щавелевой кислоты и высушивают в термостате.

б) Для выявления образования сероводорода

Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором уксусно-кислого свинца. Подсушивают на воздухе.

Полоски индикаторных бумажек на индол и сероводород помещают под пробку пробирки с засеянной культурой. В случае образования индола полоска краснеет, а при образовании сероводорода полоска чернеет.

в) Для определения нитратредуктазы

Готовят отдельно два раствора. Первый - путем растворения при нагревании в фарфоровой ступке в 20 мл дистиллированной воды 0,2 мг альфа-нафтиламина (C10H7NH2). Жидкость осторожно вливают в 150 мл 12%-го раствора уксусной кислоты. Второй - 0,5 г сульфаниловой кислоты (C6H4NH2SO3H) растворяют в 150 мл 12%-й уксусной кислоты.

Затем оба раствора сливают в темную склянку с хорошо притертой пробкой. Реактив Грисса должен быть бесцветным, если он розовеет, то им не пользуются.

Сложность приготовления реактива Грисса, дефицитность и токсичность входящих в него компонентов (в частности, альфа-нафтиламина) ограничивают возможности его применения. Этих недостатков лишен метод с использованием риванолового реактива, представляющего собой смесь равных объемов 0,1%-го раствора риванола в дистиллированной воде и 12%-го раствора соляной кислоты. В случае положительной реакции культура испытуемого штамма, выращенная в бульоне или 1%-й пептонной воде с 0,1%-м KNO3, окрашивается в красный цвет.

г) Для определения бета-галактозидазной активности приготавливают М/75 раствор орто-нитрафенил - бета-Д-галактопиранозида (ОНФГ):

ОНФГ - 80 мг

Дистиллированная вода - 75 мл

Фосфатный буфер - 5 мл.

Растворяют в дистиллированной воде при 37 °С ОНФГ, затем добавляют раствор однозамещенного фосфорно-кислого натрия (NaH2PO4 х H2O). Доводят рН до 7,0. Раствор должен быть бесцветным - хранят при температуре -4 °С. Перед использованием раствор выдерживают в течение нескольких минут до растворения фосфата, который на холоде кристаллизируется.