"МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.796-99" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.12.99)

7.8. Методы исследований моллюсков на наличие церкариев шистоматид

Церкариозы (церкариальные или шистосоматидные дерматиты; народные названия: "зуд пловцов", "зуд купальщиков", "водяной зуд", "водяная крапива") - паразитарные заболевания, вызываемые личинками (церкариями) ряда видов трематод семейства Schistosomatidae. Во взрослом состоянии они паразитируют в кровеносной системе задних отделов кишечника водоплавающих птиц (утиных, чайковых). Человек играет роль неспецифического (абортивного) хозяина, однако церкарии шистосоматид способны проникать через его кожные покровы, вызывая механические (часто множественные) поражения кожи, оказывая токсическое и сенсибилизирующее воздействие продуктами обмена и распада, способствуя заносу вторичной инфекции.

Основным видом шистосоматид, способным вызывать церкариоз у человека в России, является трематода - Trichobilharzia ocellata (возможно и Т. szidati), в меньшей степени: Bilharziella polonica, Dendtritobilharzia pulverulenta - паразитами утиных птиц, а также - Ornithobilharzia intermedia - паразитом чайковых.

Церкарии шистосоматид относятся к группе "вилкохвостых" (или фуркоцеркарий), т.к. их хвост на конце раздвоен в виде вилки (рис. 2 - не приводится). Похожее строение хвоста имеют и церкарии трематод некоторых других семейств, например Diplostomatidae, Strigeidae, также паразитов водоплавающих птиц, которые, тем не менее, не нападают на человека и не вызывают дерматиты (рис. 3 - не приводится). Учитывать этот факт необходимо для избежания неверной экспертной оценки и ошибочного завышения степени риска заражения человека церкариями в конкретных обследуемых водоемах.

Церкарии Т. ocellata довольно крупные; их общая длина (тело церкарии + стебель хвоста + фурки) достигает 1,0 - 1,3 мм. Более детально размеры церкарий выглядят следующим образом (все цифры даны в микронах): длина тела церкарии вместе с головным органом - 215 - 360, ширина - 50 - 90, длина стебля хвоста - 300 - 375, ширина стебля хвоста - 34 - 45, длина вилок (фурок) хвоста - 200 - 275, диаметр переднего (головного) органа - 60 - 85, диаметр брюшной присоски - 35.

Тело церкарии прозрачное, слегка желтоватого цвета. Железы проникновения (пять пар) колбовидной формы, хорошо видны выводные протоки. На дорзальной поверхности головного органа имеется два пигментированных глазка, расположенных немного впереди брюшной присоски. Стебель хвоста длиннее фурок. Утолщение в передней части стебля хвоста отсутствует. Брюшная присоска церкарии мощная, хорошо заметна (особенно при боковом положении церкарии) и может выпячиваться в виде "трубки".

Церкарии выходят из инвазированных моллюсков преимущественно в дневное время суток. Не совершая дальних активных миграций в водоемах, они оседают на водных растениях, прикрепляясь брюшными присосками. Ежесуточно из инвазированных моллюсков может выходить до 10 и более тысяч церкарий. Будучи потревоженными, они начинают активно плавать и, встречаясь с открытыми кожными покровами теплокровных (птиц, человека), быстро (в течение нескольких секунд) внедряются в них.

Движения живых, вышедших из моллюсков в воду, церкарий (при наблюдении под бинокуляром МБС, при увеличении в 20 - 40 раз) энергичные, как бы "ввинчивающиеся в воду хвостом вперед". Церкарии двигаются в направлении "к свету" и почти мгновенно реагируют на изменения освещенности. Механические колебания воды и растительного субстрата, имитирующие движение лапок утки, стимулируют движения церкарий. Церкарии остаются жизнеспособными и инвазионными в течение двух суток при температуре воды 17 - 20 °С и не менее трех суток при 5 - 10 °С.

Церкарии держатся в поверхностном слое воды или на глубине до 30 - 40 см в тех местах, где преимущественно обитают моллюски - промежуточные хозяева.

Роль промежуточных хозяев Т. ocellata в средней полосе России в основном выполняют моллюски рода Lymnaea: L. auricularia, L. ovata, L. psilia psilia; L. balthica (рис. 3); в меньшей степени: L. stagnalis, L. fragilis, L. palustris; относительно редко: L. intermedia, L. monnardi, L. fontinalis, L. atra. Основное значение (с учетом распространенности, плотности популяций, общей численности в водоемах разных типов, инвазированности возбудителями шистосоматид) имеют первые 4 вида (рис. 4 - не приводится).

Чаще всего моллюски встречаются в мелководных, хорошо прогреваемых участках пойменных озер, прудов, речных заливов, стариц, отстойников, обильно заросших водной растительностью. Распределение и плотность популяций моллюсков в разных зонах водоема могут быть весьма неравномерными - от единичных до 200 - 300 экз./кв. м. Особенно многочисленными могут быть популяции сравнительно мелких видов моллюсков: L. ovata, L. palustris, L. balthica.

Как правило, наиболее высокой численности моллюски достигают в прибрежной полосе шириной от 1 до 10 метров (в среднем - 5 м). Именно эти мелководные участки водоемов представляют наибольшую опасность в отношении риска заражения человека церкариозами.

7.8.2. Методы исследований моллюсков

Пораженность (экстенсивность инвазии) моллюсков шистосоматидами в водоемах не превышает 1 - 3%. Для установления истинной экстенсивности их инвазии шистосоматидами в конкретных водоемах репрезентативная исследуемая выборка моллюсков должна составлять не менее 50 (желательно - 100) экз. каждого вида, встречающегося в водоеме. Моллюсков собирают в прибрежной полосе шириной до 5 м, с грунта или водных растений, вручную или прочным бентосным сачком.

Учитывая особенности биологии легочных моллюсков (сроки жизни, не превышающие 2 лет; период размножения, приходящийся на начало летнего периода, массовая гибель взрослых ("прошлогодних") особей в середине лета, моллюсков на наличие зараженных шистосоматидами особей в популяциях исследуют в первой трети летнего сезона. Моллюсков новой генерации ("сеголеток") исследуют в последней трети летнего и начале осеннего периода.

При исследовании живых моллюсков применяют метод прижизненной диагностики, основанный на положительном фототаксисе церкарий. Он дает наиболее достоверные результаты лишь тогда, когда партеногенетический цикл паразитов в моллюсках завершился формированием церкарий. Моллюсков поштучно рассаживают в бюксы с водой, выставляют под яркий (солнечный или искусственный) свет на 30 - 40 минут. Затем бюксы поочередно просматривают под бинокуляром МБС при увеличении х20 - 30.

В микроаквариумах, где находятся инвазированные моллюски, хорошо заметны активно двигающиеся церкарии. При идентификации следует иметь в виду особенности морфологии церкарий. Прежде всего это касается фуркоцеркарий (с "раздвоенным хвостом"). Церкарий с длинными или короткими не раздвоенными хвостами, относящийся к трематодам других семейств, легко отличить от шистосоматид. Вместе с тем церкарии, имеющие раздвоенный хвост, не обязательно относятся к шистосоматидам. Таким хвостом снабжены церкарии ряда семейств, не имеющих медицинского значения, например Diplostomatidae (в основном рода Diplostomum), Strigeidae (роды: Apatemon, Cotylurus). Церкарии трематод сем. Diplostomatidae (большинство видов рода Diplostomum) отличаются по внешнему виду от церкарий шистосоматид тем, что "в свободном парении" в воде напоминают "крючки" (рис. 2). Церкарии трематод сем. Strigeidae (например, p. Apatemon) отличаются малыми размерами, длина их тела в полтора-два раза меньше церкарий шистосоматид (например, Т. ocellata), при этом длина фурок и стебля хвоста у них примерно одинаковы (рис. 2).

Для более детального исследования церкарий применяют метод компрессии гепатопанкреаса моллюсков. Тела исследуемых моллюсков (поштучно) извлекают пинцетом из раковин, раздавливают между двумя предметными стеклами и просматривают под малым увеличением (х40 - 60) обычного светового микроскопа.

7.8.3. Разработка экспертного заключения

Обследование водоема (серии водоемов, отдельных их зон) должно завершаться экспертным заключением: "Об опасности водоема(ов) в отношении риска заражения людей церкариозами". Прежде всего это необходимо в отношении водоемов, имеющих рекреационное значение, т.е. расположенных в зонах отдыха людей и разрешенных для купания.

Для составления экспертного заключения необходима первичная информация, получаемая при комплексном обследовании водоема. Обследования проводят в середине дня при солнечной погоде (т.е. при условиях максимальной активности промежуточных хозяев и церкарий шистосоматид). Информацию по нижеприведенным показателям заносят в лабораторный журнал или компьютерную базу данных. Учитывают следующие показатели:

1 - географическое положение водоема и его название;

2 - дата проведения обследования и метеоусловия;

3 - тип водоема (одиночное озеро; одиночный пруд; система сообщающихся прудов или озер; участок реки; участок канала, система водоемов, образованных в результате зарегулирования русла реки; участок водохранилища; отстойник и др.);

4 - площадь обследуемой акватории;

5 - число обследованных стаций (число обследованных в водоеме прибрежных участков длиной 5 м, шириной 1 - 2 м);

6 - видовой состав легочных моллюсков, обнаруженных в водоеме и собранных для лабораторных исследований с целью определения пораженности церкариями шистосоматид;

7 - плотность популяций моллюсков (рассчитывается по среднему числу особей на 1 кв. м);

8 - число моллюсков, взятых для лабораторных исследований (указывать отдельно для каждого вида моллюсков);

9 - экстенсивность инвазии моллюсков шистосоматидами (число инвазированных от числа исследованных в процентах для каждого вида моллюсков);

10 - степень зарастания водоема (растительности нет; зарастание слабое (менее 10 стеблей на 1 кв. м); зарастание умеренное и сильное (более 10 стеблей на 1 кв. м); наличие плавающей растительности);

11 - характер фоновой растительности (учитываются: элодея, рдесты, осоки, роголистник, нимфеи, частуха, стрелолист, плавающая растительность (прежде всего ряска), крупные макрофиты (тростник, камыш, рогоз, аир);

12 - наличие в водоеме утиных птиц (прежде всего кряквы). Указывают численность птиц на момент обследования;

13 - степень загрязненности водоема (остатки пищи, остатки предметов быта, промышленные отходы, строительный мусор и др.) Водоем (его участок) загрязнен слабо: менее 3 указанных выше предметов загрязнения на 10 м прибрежной акватории шириной 3 м; водоем (его участок) загрязнен умеренно или сильно: более 3 предметов загрязнения в той же акватории;

14 - использование водоема в рекреационных целях ("ДА", "НЕТ"; отдельно указывают: используется ли водоем или отдельный его участок, как официально разрешенное место для купания людей);

15 - благоустроенность водоема: водоем полностью бетонирован, полностью или частично бетонирована береговая линия, производится или нет регулярная очистка от мусора и растительности, имеются или нет оснащенные пляжные территории и огороженные от остальных мест акватории для купания с песчаным грунтом без растительности, имеются или нет (на остальных береговых участках или в целом на несанкционированных для купания водоемах) знаки, запрещающие купание, подкормку птиц, свалку мусора.

На основании проведенных полевых и лабораторных исследований составляют экспертное заключение об эпидемической опасности водоема (серии водоемов, отдельных их участков) в отношении риска заражения людей церкариозом. При этом делают вывод о том, что:

1 - риск заражения отсутствует (либо: нет экологических условий, благоприятных для обитания промежуточных хозяев возбудителей и нет легочных моллюсков, либо: нет источника заражения, либо: отсутствуют оба эти фактора);

2 - имеется потенциальный риск заражения (на исследуемой территории в принципе имеется источник инвазии (водоплавающие, прежде всего утиные, птицы) и имеются популяции промежуточных хозяев возбудителя (одного или нескольких видов легочных моллюсков). Однако на период обследования водоема в исследованной выборке моллюсков не выявлены особи, зараженные церкариями шистосоматид);

3 - риск заражения присутствует (имеются популяции легочных моллюсков и в исследованной выборке обнаружены особи, зараженные шистосоматидами).

Во избежание ошибочного суждения о степени риска, и учитывая, что этот показатель изменчив в зависимости от целого ряда условий, определением "риск заражения присутствует", как правило, целесообразно ограничиться.

Когда ряд факторов со всей очевидностью указывает на высокий риск заражения в конкретных водоемах или их отдельных участках (обнаружена высокая численность популяций промежуточных хозяев, выявлена высокая пораженность моллюсков церкариями шистосоматид, имеется обильное зарастание водоема при одновременно его слабо выраженной загрязненности, водоем фактически используется для купания, особенно детьми, даже в тех случаях, когда он официально не признан рекреационной зоной), в экспертном заключении этот факт следует особо подчеркивать.

Заключение

Широкое распространение паразитарных болезней среди людей и животных способствует интенсивному обсеменению окружающей среды их возбудителями (яйца аскарид, власоглава, описторхиса, онкосферы тениид, цисты амеб, лямблий, балантидий, ооцисты криптоспоридий и др.).

Выявление возбудителей паразитозов (яйца и личинки гельминтов, цисты кишечных патогенных простейших) - наиболее точный показатель санитарно-эпидемиологического неблагополучия (фекального загрязнения) объектов окружающей среды и представляет значительный интерес для эпидемиологов и санитарных врачей. Поэтому наряду с бактериологическими, химическими, вирусологическими обязательны и санитарно-паразитологические исследования объектов окружающей среды.

Возбудителей инвазий обнаруживают в почве, воде, предметах обихода, овощах, столовой зелени (абиотическая среда), в организмах окончательных, промежуточных и дополнительных хозяев (биотическая среда).

Санитарно-паразитологический контроль за состоянием среды обитания человека является важной составной частью профилактической работы органов и учреждений здравоохранения.

Санитарно-оздоровительные и профилактические мероприятия с обеззараживанием источников инвазии и строгим лабораторным контролем за работой сооружений по подготовке питьевой воды, очистке сточных вод и животноводческих стоков, обезвреживанием нечистот, осадков сточных вод перед сбросом в поверхностные водоемы или на поля для удобрения и орошения сельскохозяйственных культур на данном этапе являются ведущими.

Лабораторные методы санитарно-паразитологических исследований являются основным и часто единственным способом установить степень риска заражения населения возбудителями гельминтозов и кишечных протозоозов. На основе анализа показателей степени загрузки объектов окружающей среды инвазионным материалом нечистот, динамики снижения инвазированности и заболеваемости населения и пораженности эпидемически значимых животных прогнозируется направленность изменения риска заражения и условия улучшения паразитологической ситуации как по отдельным инвазиям, так и по группам паразитозов.

Результаты лабораторных санитарно-паразитологических исследований позволяют оценивать обсемененность окружающей среды возбудителями паразитозов, риск новых заражений, прогнозировать заболеваемость населения и на основе этого планировать санитарные, противоэпидемические и лечебно-профилактические мероприятия, а также контролировать их эффективность.

Список литературы

1. Гигиенические требования к использованию сточных вод и их осадков для орошения и удобрения. СанПиН 2.1.7.573-96.

2. Требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. СанПиН 2.1.4.559-96.

3. Санитарно-паразитологическое исследование воды. МУК 4.2.668-97. М., 1997. 10 с.

4. Охрана природы. Почва. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического исследования. ГОСТ 17.4.4.02-84.

5. Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест. МУ 2.1.7.730-99.

6. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования окружающей среды. М.: Росагропромиздат, 1991. 145 с.