Законодательная база Российской Федерации

ПОСТАНОВЛЕНИЕ Главного государственного санитарного врача РФ от 03.02.99 N 4 "ОБ УТВЕРЖДЕНИИ САНИТАРНЫХ ПРАВИЛ" (вместе с "САНИТАРНЫМИ ПРАВИЛАМИ "БЕЗОПАСНОСТЬ РАБОТЫ С МИКРООРГАНИЗМАМИ III - IV ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ И ГЕЛЬМИНТАМИ". СП 1.2.731-99")

Приложение 7.1
(обязательное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

(Извлечение из приложения 5.1 к СП 1.2.011-94)

<*> По мере открытия новых возбудителей инфекционных болезней списки будут постоянно дополняться.

Ehrlichia sennetsu - болезни сеннетсу

Е.canis - название отсутствует

Е.chaffeensis - название отсутствует

Примечания. 1. Аттенуированные штаммы возбудителей I - II групп относят к микроорганизмам III группы патогенности. Аттенуированные штаммы III - IV групп относят к IV группе патогенности.

2. В качестве источника заболеваний человека и животных, вызываемых микроорганизмами I - IV групп, следует считать инфицированных: человека, теплокровных животных, переносчиков, объектов внешней среды.

Приложение 7.2
(обязательное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

IV группа

Приложение 7.3
(обязательное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

<*> Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза поваренной соли на установках, разрешенных к производству и применению в установленном порядке.

<**> Анолиты, получаемые электрохимическим методом на установках, разрешенных к производству и применению в установленном порядке, используют по режимам, указанным в Методических указаниях, утвержденных Госкомсанэпиднадзором России (до 01.01.97) или Минздравом России (после 01.01.97).

Примечания. 1. Отсчет времени обеззараживания при кипячении начинается с момента закипания воды.

2. Допускается использование зарубежных дезинфицирующих средств, зарегистрированных и разрешенных для применения в России.

Приложение 7.4
(справочное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание активного хлора - АХ не менее 26%)

0,5%, 1%, 2%, 3% (по препарату) растворы.

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%)

Сухое вещество,

0,5%, 1%, 2% (по препарату) осветленные растворы,

10% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы,

20% (по препарату) хлорно - известковое молоко.

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%)

Сухое вещество,

0,5%, 1%, 2% (по препарату) осветленные растворы,

10% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

4. Нейтральный гипохлорит кальция - НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б)

Сухое вещество,

0,15% (по АХ) раствор,

0,25%, 0,5%, 1% (по АХ) осветленные растворы,

5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы.

5. Гипохлорит кальция технический - ГКТ (содержание АХ не менее 35%)

Сухое вещество,

1%, 1,5% (по препарату) осветленные растворы,

5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы.

6. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%)

Сухое вещество,

0,25%, 0,5%, 1% (по препарату) осветленные растворы,

5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы.

7. Двуосновная соль гипохлорита кальция - ДСГК (содержание АХ не менее 30%)

сухое вещество,

1% (по препарату) осветленный раствор,

5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы.

8. Гипохлорит натрия (содержание АХ не менее 14%)

1% (по АХ) раствор.

9. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза поваренной соли на установках, разрешенных к производству и применению

0,125%, 0,25% (по АХ) растворы.

10. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению

С содержанием 0,03%, 0,05%, 0,06% АХ.

11. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%)

2%, 5% (по препарату) растворы.

12. ДП-2 (содержание АХ не менее 40%)

0,1%, 0,2% (по препарату) растворы.

13. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты - НУК не менее 5%)

1%, 2% (по препарату) растворы.

14. Пергидроль (содержание перекиси водорода 30 - 35%)

3% (по ДВ) раствор перекиси водорода,

3% (по ДВ) раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства ("Прогресс", "Новость", "Астра", "Лотос"),

6% (по ДВ) раствор перекиси водорода.

15. ПВК (содержание перекиси водорода не менее 30%)

0,5, 0,75, 2% (по перекиси водорода) раствор.

16. Пероксимед (содержание перекиси водорода 30% и ПАВ)

3% (по перекиси водорода) раствор.

17. Пероксогидрат фторида калия - ПФК-1 (содержание перекиси водорода не менее 30%)

3%, 6%, 7%, 9% (по препарату) растворы.

18. Полисепт (содержание полигексометиленгуанидина хлорида 25%)

1% (по препарату) раствор.

19. Демос (содержащий комплекс катионных и др. ПАВ)

5%, 10% (по препарату) растворы.

20. Велтолен (содержание кларата мочевины с дидецилметиламмоний бромида 20%)

1% (по препарату) раствор.

21. Фогуцид (содержание полигексаметиленгуанидина фосфата 19 - 25%)

0,5 - 1% (по ДВ) растворы.

22. Ника - экстра М (содержание алкилдиметилбензиламмоний хлорида 3,5 - 4,5%)

0,5%, 2% (по препарату) растворы.

23. Лизол А (содержание фенолов 50%)

5% (по препарату) раствор.

24. 1-хлор-бета-нафтол

0,5%, 2% (по препарату) растворы.

25. Едкий натр

10% (по препарату) раствор.

26. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.)

1% (по препарату раствор).

27. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксам и катамин АБ)

1,5% (по препарату) раствор.

28. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%)

готовое к применению средство.

29. Формалин

3%, 10%, 20%, 40% (по формальдегиду) водные растворы.

30. Аммиак 25% (по ДВ) водный раствор.

Для нейтрализации формальдегида применяется соотношение 1:1.

31. Дихлор-1, Белка, Блеск, Блеск-2, Санита, Дезус и др. бытовые чистяще - дезинфицирующие средства: пасты, порошки и др. формы.

32. Кипячение

Вода,

2% раствор пищевой соды,

2% раствор кальцинированной соды.

33. Обработка водяным насыщенным паром под давлением (автоклавирование).

34. Этиловый спирт 70%, 96%, смесь Никифорова.

35. Обработка горячим воздухом - 180 град. C.

36. Сжигание.

37. Прокаливание.

38. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.

39. Аэрозольный метод обеззараживания.

40. Газовый метод (дезинфекция парами формальдегида).

41. Ультрафиолетовое облучение.

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%)

5% (по препарату) раствор,

0,5 и 1,0% (по АХ) активированные растворы.

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%)

сухое вещество,

2 - 10% (по препарату) растворы,

20% хлорно - известковое молоко,

0,25 - 0,5% (по АХ) активированные растворы.

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%)

сухое вещество,

2 - 10% (по препарату) растворы,

0,25 - 0,5% (по АХ) активированные растворы.

4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%)

сухое вещество,

20% хлорно - известковое молоко,

1% (по препарату) раствор.

5. Двуосновная соль гипохлорита кальция ДСГК (содержание АХ не менее 30%)

сухое вещество.

6. Нейтральный гипохлорит кальция - НГК (содержание АХ не менее 52% марки А и не менее 24% марки Б)

сухое вещество,

1, 5% (по АХ) растворы.

7. Гипохлорит кальция технический - ГКТ (содержание АХ не менее 35%)

сухое вещество,

2% (по препарату) раствор.

8. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза на установках, разрешенных к производству и применению

0,25, 0,5% (по АХ) растворы.

9. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению, с содержанием 0,05; 0,09% AX.

10. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%)

10% (по препарату) раствор.

11. ДП-2 (содержание АХ не менее 35%)

сухое вещество,

0,5% (по препарату) раствор.

12. Дезоксон-1 и Дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты НУК не менее 5%)

0,25, 0,5, 1,0% (по НУК) растворы.

13. Пергидроль (содержание перекиси водорода - ПВ не менее 30%)

3% раствор.

14. Пероксимед (содержание ПВ не менее 30% и моющие компоненты)

3 и 4% (по ПВ) растворы.

15. ПВК (содержание ПВ не менее 30%)

2,5% (по ПВ) раствор.

16. Лизол марки А (содержание фенолов - 50%)

5% раствор.

17. 1-хлор-бета-нафтол

0,5% (по препарату) раствор.

18. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида)

готовое к применению средство.

19. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.)

1% (по препарату раствор).

20. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксам и катамин АБ)

1,5% (по препарату) раствор.

21. Кипячение

2% раствор пищевой соды,

2% раствор кальцинированной соды.

22. Обработка водяным насыщенным паром.

23. Горячий воздух 180 град. C.

24. Сжигание.

25. Прокаливание.

26. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.

27. Ультрафиолетовое облучение.

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%)

1 - 4% активированные растворы, содержащие 0,25 - 1% АХ.

2. Хлорная известь или белильная термостойкая известь (содержание АХ не менее 25%)

сухое вещество,

20% осветленные и неосветленные растворы, содержащие не менее 5% АХ,

4% осветленные активированные растворы, содержащие не менее 1% АХ.

3. Нейтральный гипохлорит кальция - НГК (содержание АХ не менее 52%)

сухое вещество,

15% осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ,

2% осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1% AX.

4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание активного хлора не менее 47%)

сухое вещество,

15% осветленные растворы, содержащие не менее 5% AX,

2% осветленные активированные растворы, содержащие не менее 1% AX.

5. Двуосновная соль гипохлорита кальция - ДСГК (содержание АХ не менее 30%)

сухое вещество,

4% активированные растворы, содержащие не менее 1,2% АХ.

6. Едкий натр

10% раствор (70 град. C).

7. Пергидроль, содержащий 30 - 35% перекиси водорода (ПВ)

6% раствор ПВ с 0,5% моющего средства ("Прогресс", "Новость", "Астра", "Лотос"),

3% раствор ПВ с 0,5% моющего средства при температура раствора 50 град. C.

8. ПВК (содержание ПВ не менее 30%)

раствор, содержащий 4% ПВ при температуре 20 град. C,

раствор, содержащий 3% ПВ при температуре 50 град. C.

9. Пероксимед (содержание ПВ 30% и ПАВ)

3% (по ПВ) раствор при температуре 20 и 50 град. C,

6% (по ПВ) раствор.

10. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание НУК не менее 5%)

Раствор, содержащий 1% надуксусной кислоты (НУК).

11. Формалин

20%, 40% (по формальдегиду) водные растворы.

0,2% раствор формальдегида с 0,2% мыла или ОП-10 при температуре 60 град. C

12. Кипячение.

13. Прокаливание.

14. Сжигание.

15. Сухой горячий воздух.

16. Обработка паром под давлением.

17. Все емкости, в которых проводится обеззараживание, должны быть закрыты крышкой, включая банки из-под животных.

18. Обработка в камерах: паровоздушный и пароформалиновый методы.

19. Аэрозольный метод обеззараживания.

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%)

1%, 3%, 4% (по препарату) растворы,

0,5%, 1,5% (по препарату) активированные растворы.

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%)

сухое вещество,

1%, 3%, 10% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы,

20% (по препарату) хлорно - известковое молоко.

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%)

сухое вещество,

1%, 3%, 10% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%)

сухое вещество,

1,5%, 5% (по препарату) растворы,

0,5% (по АХ) осветленный раствор.

5. Нейтральный гипохлорит кальция - НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б)

сухое вещество,

1%, 1,5%, 5% (по препарату) растворы,

0,6% (по АХ) осветленный раствор.

6. Гипохлорит кальция технический - ГКТ (содержание АХ не менее 35%)

сухое вещество,

1%, 1,5%, 5%, 7% (по препарату) растворы.

7. Двуосновная соль гипохлорита кальция - ДСГК (содержание АХ не менее 30%)

сухое вещество,

1%, 1,5%, 3%, 5%, 7% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы.

8. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%)

2%, 5% (по препарату) растворы.

9. ДП-2 (содержание АХ не менее 40%)

0,1%, 0,2%, 0,5% (по препарату) растворы.

10. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза из растворов поваренной соли на установках, разрешенных к применению

0,25%, 0,5% по АХ растворы.

11. Анолит, получаемый на установках, разрешенных к применению.

12. Пергидроль (с содержанием ДВ 30 - 35%)

4%, 6% растворы перекиси водорода (ПВ),

4%, 6% растворы ПВ с 0,5% моющего средства,

3% раствор ПВ с 0,5% моющего средства при температуре раствора 50 град. C.

13. Пероксогидрат фторида калия - ПФК-1 (содержание перекиси водорода не менее 30%)

4%, 6% (по препарату) растворы.

14. ПВК (содержание перекиси водорода до 30%)

3% (по ПВ) раствор.

15. Пероксимед (содержание перекиси водорода 30% и ПАВ)

3% (по ПВ) раствор.

16. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (с содержанием НУК не менее 5%)

0,1%, 0,5% (по НУК) растворы.

17. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.)

1% (по препарату) раствор.

18. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксам и катамин АВ)

1,5% (по препарату) раствор.

19. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%)

Готовое к применению средство.

20. Формалин

40% (по формальдегиду) водный раствор.

21. Аммиак

10%, 25% (по ДВ) водный раствор.

Для нейтрализации формальдегида применяется соотношение 1:1.

22. Едкий натр

10% (по препарату) раствор.

23. Этиловый спирт

70% раствор.

24. Сода пищевая (натрий двууглекислый)

2% раствор.

25. Сода кальцинированная

2% раствор.

26. Моющее средство

0,5% раствор.

27. Обеззараживание водяным насыщенным паром под избыточным давлением в паровом стерилизаторе (автоклаве).

28. Обеззараживание сухим жаром в воздушном стерилизаторе.

29. Кипячение.

30. Сжигание.

31. Обработка в дезинфекционной камере: паровоздушный и пароформалиновый методы.

32. Аэрозольный метод обеззараживания.

33. Газовый метод (дезинфекция парами формальдегида).

34. Ультрафиолетовое облучение.

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%)

1%, 3% (по препарату) растворы,

0,5% активированный раствор.

2. Хлорная известь или белильная термостойкая известь (содержание АХ не менее 25%)

сухое вещество,

20% осветленные и неосветленные растворы, содержащие не менее 5% АХ,

3% осветленные растворы, содержащие не менее 1% АХ.

3. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%) или нейтральный гипохлорит кальция - НГК (содержание АХ не менее 47% для марки А и не менее 24% для марки Б)

15% осветленный или неосветленный растворы, содержащие не менее 5% активного хлора,

1,5% раствор, содержащий не менее 0,5% активного хлора.

4. Гипохлорит кальция технический - ГКТ (содержание АХ не менее 35%)

сухое вещество,

7% (по препарату) раствор.

5. Пергидроль (содержание перекиси водорода 30 - 35%)

6% раствор перекиси водорода,

6% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства,

3% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства при температуре 60 град. C.

6. Формалин

20% (по формальдегиду) водный раствор.

7. Едкий натр

3%, 5%, 10% (по препарату) растворы.

8. Кипячение

Вода,

2% раствор пищевой соды,

2% раствор кальцинированной соды.

9. Сжигание.

10. Сухой горячий воздух при 180 град. C.

11. Обработка паром под давлением (автоклавирование).

12. Спирт 70%.

13. Обработка в камерах: паровоздушый метод, пароформалиновый метод.

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%)

1% (по AX) активированный раствор,

5% (по препарату) раствор.

2. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%)

2% (по АХ) раствор.

3. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза на установках, разрешенных к производству и применению

0,5% (по АХ) раствор.

4. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%)

2%, 5% (по препарату) растворы.

5. ДП-2 (содержание АХ не менее 40%)

0,5% (по препарату) раствор.

6. Пергидроль (содержание ПВ 30 - 35%)

6% раствор ПВ с 0,5% моющего средства.

7. ПВК (содержание перекиси водорода 38%)

2%, 4% (по ПВ) растворы,

5% раствор.

8. Пероксимед (содержание ПВ 30% и ПАВ)

4%, 5% растворы по ПВ.

9. Дезоксон-1 или Дезоксон-4 (содержание НУК не менее 5%)

0,25, 0,5% (по НУК) растворы.

10. Бензилфенол

2, 2,5% растворы.

11. Демос (содержащий комплекс катионных и др. ПАВ)

5%, 10% (по препарату) растворы.

12. Лизол А

10% раствор.

13. Формалин

5%, 10% растворы.

14. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.)

1% (по препарату) раствор.

15. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксам и катамин АБ)

1,5% (по препарату) раствор.

16. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%)

Готовое к применению средство.

17. Йодонат

1% раствор.

18. Кипячение

2% раствор пищевой соды,

2% раствор кальцинированной соды.

19. Обработка паром под давлением.

20. Сжигание.

21. Прокаливание.

22. Ультрафиолетовое облучение.

23. Обработка в камерах: паровоздушный метод, пароформалиновый метод.

Примечание. В качестве активаторов хлорных препаратов могут быть использованы аммонийные соли (хлорит, сульфит или нитрат аммония) в соотношении с активным хлором 1:1 или 1:2, или аммиак в соотношении с активным хлором 1:8 (хлора в 8 раз больше, чем аммиака).

Приложение 7.5
(справочное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

(Извлечение из "Методических указаний по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов", утв. Минздравом СССР 28.02.91 N 15/6-5)

1. Бактериологический контроль работы стерилизаторов проводят после монтажа и ремонта аппаратуры, а также в процессе его эксплуатации (плановый - 2 раза в год и при получении неудовлетворительных результатов контроля).

Контроль эффективности работы стерилизаторов осуществляют бактериологическим методом, используя биотесты на основании гибели спор тест - культуры.

Биотесты представляют собой флаконы из стеклянной трубки для лекарственных средств ФИ/1-5 НС 1 ТУ 64-0709-10-88 (инсулиновые флаконы или чашечки из алюминиевой фольги (диск размером 14 мм с луночкой - вдавление от неоточенного края карандаша)), содержащие высушенные споры тест - культуры Вас. stearothermophilus ВКМ В-718, помещенные в пакеты из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85). Упакованные тесты нумеруют и размещают в контрольные точки паровых стерилизаторов (5 - 10 тестов). По окончании стерилизации биотесты подвергают бактериологическому исследованию.

2. Штамм Вас. stearothermophilus ВКМ В-718 подвижная термофильная палочка, по Граму окрашивается положительно, культивируется при температуре 55 +/- 1 град. C, исключающей развитие других широко распространенных микроорганизмов. Споры овальные, расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (pH 7,3 +/- 0,1) через 24 часа образует помутнение среды, на мясопептонном агаре (pH 7,3 +/- 0,1) - слабо выпуклые колонии диаметром 2 - 4 мм с ровным краем. Штамм непатогенен для человека и животных. Штамм получен из Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов, хранится в музее культур НИИ профилактической токсикологии и дезинфекции (117246, г. Москва, Научный проезд, 18).

В ампулу с лиофилизированной культурой вносят 0,2 мл стерильной водопроводной воды и оставляют в течение 30 минут при комнатной температуре.

Одну - две капли культуры засевают в 2 пробирки с бульоном (МПБ Хоттингера, питательный сухой) с 0,5% глюкозы. Суточную бульонную культуру засевают в пробирки на скошенный агар (Хоттингера, мясопептонный, сухой питательный). Для получения спор культуру, выращенную в твердой питательной среде, смывают 5 мл стерильной водопроводной воды и переносят во флаконы со скошенным картофельнопептонным агаром. Взвесь покачиванием флакона равномерно распределяют по поверхности среды, инкубируют при 55 град. C в течение 10 - 12 суток в наклонном положении агаром вверх. Для создания достаточной влажности в термостат помещают открытые емкости с водой. На 7, 10 и 12 сутки культуру проверяют на интенсивность спорообразования. Достаточным количеством считают 80 - 90 спор в поле зрения. Культуру смывают стерильной дистиллированной водой. В целях освобождения от вегетативных клеток суспензию прогревают на водяной бане при температуре 65 - 70 град. в течение 30 мин., центрифугируют трехкратно с частотой вращения 33, 33с-1 (2000 об./мин.) по 15 минут, промывая осадок стерильной дистиллированной водой после каждого центрифугирования. Отмытые споры суспендируют в стерильной дистиллированной воде в соотношении 1:1 по объему. Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре 4 град. C в стерильных пробирках, закрытых ватно - марлевыми пробками с резиновыми колпачками (срок хранения 2 года).

Чистоту культуры на всех этапах культивирования контролируют высевом на агаровые пластинки.

Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной суспензии десятикратно разводят до 10 в степени -7 стерильной дистиллированной водой, высевая на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл ориентировочно по 10 в степени -5 - 10 в степени -7 (предел разведения зависит от титра полученных спор). Посевы инкубируют в течение 48 часов, проводят подсчет выросших колоний. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии определяют как среднее арифметическое число колоний с учетом разведения исходной суспензии и объема пробы для посева.

Пример расчетов. Предположим, что при посеве на три чашки Петри с агаром суспензии в разведении 1:100000 (10 в степени -5 ) подсчитано 140, 110 и 134 колонии. Аналогичные высевы из разведений 10 в степени -6 привели к образованию 12, 14 и 16 колоний; из

Вычисляем общее число колоний, а затем среднее количество колоний для каждого разведения 128, 14 и 5.

Из расчета посевной дозы (0,1 мл на каждую чашку) вычисляем титр жизнеспособных спор в 1 мл исходной суспензии с учетом разведения, далее находим среднее арифметическое число колоний:

Таким образом, титр исходной суспензии составит:

Исходная суспензия должна содержать не менее

исходной суспензии с помощью дозатора пипеточного (ТУ 64-1-3329-81) в 0,02 мл в носители (стерильные инсулиновые флакончики с ватно - марлевой пробкой или чашечки из алюминиевой фольги, разложенные в чашки Петри), подсушивают в термостате при 37 град. C или в эксикаторе над осушителем (силикагель, хлористый кальций) при комнатной температуре в течение 24 часов.

Для определения фактической обсемененности исследуют не менее 3 биотестов от каждой группы. Во флаконы (чашечки) вносят по 1,0 мл стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги, отмывают в широкогорлых пробирках с бусами в 10 мл) и встряхивают в течение 10 минут на аппарате для встряхивания жидкостей с последующим высевом на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл суспензии из трех последовательных десятикратных разведений.

3. Определение устойчивости спор тест - культур к действию водяного насыщенного пара под избыточным давлением проводят при температуре 120 +/- 2 град. C.

Биотесты в упаковочной бумаге помещают в стерилизационной коробке в камеру парового стерилизатора. После набора давления в водопаровой камере 0,11 +/- 0,01 МПа (1,1 +/- 0,1 кГс/кв. см) проводят продувку парового стерилизатора (вытеснение воздуха паром из камеры парового стерилизатора) в течение 10 минут при открытом спускном кране и давлении в стерилизационной камере от 0,01 до 0,02 МПа (от 0,1 до 0,2 кГс/кв. см). После продувки доводят давление пара в стерилизационной камере до 0,11 +/- 0,01 МПа (1,1 +/- 0,1 кГс/кв. см), температура 120 +/- 2 град. C и через 5 минут (времени выживания спор тест - культуры) с момента установления давления спускают пар. Для уменьшения времени воздействия пара до и после экспозиции подъем давления проводят максимум в течение 8 минут, спуск - в течение 3 минут.

Аналогичное исследование проводят в течение 15 минут времени выдержки (время гибели спор тест - культуры). Контроль температуры осуществляют максимальными термометрами. По окончании времени выдержки биотесты вынимают из стерилизатора и проводят бактериологическое исследование.

Партию биотестов считают годными для использования, если показатели устойчивости спор тест - культуры соответствуют вышеописанным требованиям.

4. Для определения эффективности работы стерилизатора в обеззараженные биотесты и контрольный тест (без стерилизации) стерильно вносят по 5 мл питательной среды, инкубируют при 55 град. C в течение 7 суток при ежедневном просмотре посевов, делая высевы на агаровые пластинки, из проросших емкостей.

При использовании полусинтетической среды с индикатором феноловым красным рост тест - культуры определяют по изменению красного цвета среды (pH 7,7 +/- 0,1) на желто - оранжевый (pH 6,7 +/- 0,1) за счет разложения глюкозы с образованием кислоты. В целях исключения ложного отрицательного результата (при наличии роста тест - культуры отсутствует изменение цвета питательной среды) флаконы (пробирки) должны быть плотно закрыты стерильными резиновыми пробками (N 7,5; 12,5).

Отсутствие роста тест - культуры указывает на эффективность работы стерилизатора. Рост других культур микроорганизмов относят за счет вторичного обсеменения. При наличии роста тест - штаммов проводится повторный контроль на удвоенном количестве биотестов. Если и при повторной проверке тест - культуры не инактивируются, осуществляют тщательный контроль технического состояния аппарата и контрольно - измерительных приборов. При отсутствии роста тест - культур в контрольном биотесте (не подвергшемся стерилизации) устанавливается причина (нежизнеспособность тест - культуры, несоблюдение методики приготовления биотестов, питательных сред, условий культивирования).

5. Для спорообразования используют:

- картофельно - пептонный агар (пептон - 5,0, мел - 1,0, агар - 25,0, картофельная вода - 1000 мл; pH 7,1 +/- 0,1). Сырой картофель (200 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды) тщательно моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими ломтиками, заливают водопроводной водой и кипятят 30 мин. после закипания (молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и фильтруют в холодном состоянии через ватно - марлевый фильтр. Доводят объем фильтрата до первоначального. Устанавливают pH 7,1 +/- 0,1. Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая, до полного расплавления агара, фильтруют через ватно - марлевый фильтр, после чего добавляют мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120 град. C в течение 30 мин. После стерилизации среду во флаконах скашивают;

- пшеничный агар (пшеничная крупа "Артек" или "Полтавская" - 500,0 , агар - 25,0, дистиллированная вода - 1000 мл), pH - 7,3 +/- 0,1.

Пшеничную крупу "Артек" ("Полтавская") заливают дистиллированной водой. Через 12 часов настой аккуратно сливают, не выжимая, доводят до первоначального объема, добавляют агар и растапливают на водяной бане или в автоклаве (текучим паром 1 час). Остывший агар выкладывают на противень и срезают осадок. Агар растапливают на водяной бане, постоянно помешивая. Устанавливают pH 7,3 +/- 0,1. Разливают во флаконы. Стерилизуют текучим паром по 1 часу в течение 3 суток. После стерилизации среду скашивают.

6. Для контроля используют бульон Хоттингера pH 7,3 +/- 0,1, агар Хоттингера pH 7,3 +/- 0,1, питательный бульон сухой pH 7,1 +/- 0,1 (Дагестанский НИИ питательных сред), питательный агар сухой pH 7,3 +/- 0,1 (Дагестанский НИИ питательных сред), среду питательную для контроля стерильности сухую (предприятие Центрального НИИВС им. И.М. Мечникова), pH 7,0 +/- 0,1, бульон из перевара кровяных сгустков, полусинтетическую среду с индикатором феноловым красным pH 7,7 +/- 0,1 (аммоний фосфорно - кислый однозамещенный - NH4H2PO4 - 1,0 г; магний сернокислый - MgSO4 - 0,2 г, калий хлористый - KCl - 0,2 г, глюкоза - 5,0 г, феноловый красный 0,02 г, бульон Хоттингера с содержанием аминного азота - 140 - 160 мг% - 200 мл, дистиллированная вода - 800 мл; pH 7,7 +/- 0,1. Компоненты смешивают и растворяют при нагревании на водяной бане, доводят pH до 7,7 +/- 0,1, разливают во флаконы, стерилизуют при 110 град. C в течение 30 минут).

Приложение 7.6
(справочное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

(Извлечение из "Методических указаний по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов", утв. Минздравом СССР 28.02.91 N 15/6-5)

<1> - относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых должно проводиться с предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении;

<2> - ГФ X - Государственная фармакопея СССР, X-е издание;

<3> - "+" - температурный параметр, для контроля используется химическое соединение;

<4> - используют любой из красителей, перечисленных в рецептуре 1;

<5> - при использовании серы в качестве химического теста добавление красителя нецелесообразно, так как при плавлении вещества не происходит его смешение с красителем.

ХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ТЕМПЕРАТУРНЫХ ПАРАМЕТРОВ РЕЖИМОВ РАБОТЫ ВОЗДУШНЫХ СТЕРИЛИЗАТОРОВ <1>

<1> - в состав химических тестов, используемых для контроля работы воздушных стерилизаторов, краситель не добавляют, т.к. указанные химические соединения изменяют свой цвет при достижении температуры плавления;

<2> - относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых проводится с предосторожностью, хранение в закрытых шкафах в сухом помещении;

<3> - ГФ X - Государственная фармакопея СССР, X-е издание;

<4> - "+" - температурный параметр, для контроля используют химическое соединение.

Химические индикаторы в паровом стерилизаторе размещают в каждой обеззараживаемой емкости и два - в самой камере, в воздушных стерилизаторах - от 5 до 15 в зависимости от емкости камеры.

Вместо химических тестов могут быть использованы термовременные индикаторы (ТВИ), контролирующие температуру и время стерилизации (Т-160 и ИС-180) при воздушной стерилизации, а при паровой стерилизации (Т-120 и ИС-132) и наличия пара. Индикаторы представляют собой полоски длиной 2 - 3 см, отрываемые от бумажной ленты с нанесенным на нее индикаторным слоем, цвет которого необратимо меняется только при соблюдении режимов стерилизации, утвержденных ГОСТом 22649-83 и ОСТом 42-21-2-85.

Приложение 7.7
(справочное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

1. Замену фильтров тонкой очистки (Д-13, Д-15, Д-23 ФТО и др.) вытяжных систем вентиляции проводят согласно графику. При возрастании динамического сопротивления фильтра в 2 раза или при его повреждении проводится его внеплановая замена.

2. Перед снятием фильтра проводят предварительную дезинфекцию фильтра и магистрального воздуховода парами формалина либо аэрозольным способом.

3. Распыление дезинфектанта осуществляется через штуцер в воздуховоде при работающей вентиляции. По окончании распыления вентиляция выключается и по истечении времени экспозиции фильтр может быть снят.

4. Работу по демонтажу фильтра проводят в костюме IV типа с использованием резиновых перчаток (под рабочими рукавицами) и респиратора.

5. Снятый фильтр помещают в крафт - мешок или другую упаковку и переносят для автоклавирования или сжигания установленным порядком.

6. Перед установкой фильтр должен быть проверен на проскок (по масляному туману, с использованием биологического аэрозоля или другим способом). В процессе эксплуатации фильтр проверяется на проскок не реже 1 раза в год.

7. Работы по замене фильтра осуществляются техническим персоналом под наблюдением сотрудника подразделения, отвечающего за соблюдение требований биологической безопасности.

8. Для оценки защитной эффективности фильтров используют в качестве модели для создания аэрозоля культуры B.prodigiosum (ser. marcescens, chromobacterum prodigiosum) или Е.Coli. Для создания аэрозоля используют специальные устройства - распылители. В целях минимального рассеивания бактериального аэрозоля в окружающую среду и направления факела аэрозоля в отверстие воздуховода перед фильтром применяют специальную насадку. Для определения счетной концентрации и фракционно - дисперсного состава биологического аэрозоля используют импактор микробиологический БП-50, разработанный Научно - исследовательским институтом биологического приборостроения.

9. Отбор проб аэрозоля осуществляют двумя импакторами одновременно до прохождения фильтра (контроль) и после прохождения его (опыт). По результатам роста тест - штамма на агаровых пластинках до и после прохождения фильтра судят об его защитной эффективности. Используют односуточную культуру тест - штамма в концентрации 5 x 10 в степени 8 - 1 x 10 в степени 9 м.к. в мл. Для проведения опыта

приборы монтируют в следующей последовательности: насадку устанавливают на отверстии воздуховода перед фильтром с помощью болтов, шланги компрессора надевают на конец форсунки распылителя. К входному и выходному отверстиям воздуховода после фильтра присоединяют через шланги два микробиологических импактора БП-50, подключают к сети компрессор и оба аспиратора (пылесос бытовой). Перед началом опыта проверяют работу компрессора и скорость движения воздуха через импактор. Опыт проводят при работающей вентиляции.

10. В колбу распылителя заливают приготовленную взвесь тест - штамма, после чего вставляют форсунку. Устанавливают распылитель на уровне отверстия воздуховода, включают компрессор и оба импактора. Соблюдаются следующие условия: скорость распыления по жидкости Ож = 1 мл/мин., скорость распыления по воздуху V = 50 л/мин., время распыления - 10 минут, средний диаметр аэрозольных частиц d ср = 2,4 мкм (lgd = 0,389), максимальный диаметр частиц d max = 7 мкм при логарифмически нормальном распределении (среднее квадратичное отклонение lgd = 0,229); скорость отбора проб аэрозоля импактором БП-50 V = 50 л/мин., время отбора проб аэрозоля - 10 минут. По истечении срока отключают сначала компрессор, а затем импакторы. Чашки Петри вынимают из импакторов и инкубируют при 37 град. C в течение 2 суток. После проведения опыта установку дезинфицируют.

11. Учет результатов проводят через 24 и 48 часов. В популяции B.prodigiosum наряду с типично окрашенными колониями могут появляться различные по цвету варианты: розовые, слабо розовые, с розовым центром. Об эффективности задержания аэрозольных частиц исследуемым фильтром судят по отношению числа аэрозольных частиц, осевших до фильтра и после него. Эффективность фильтра выражают в процентах. При исправных фильтрах не должно быть роста колоний тест - культуры на чашках после фильтра, в то время как до фильтра (для обеспечения достоверности испытаний) их должно быть не менее 200 колоний на чашках импактора БП-50.

12. Проверка боксов биологической безопасности I, II и III классов проводится при установке его в лаборатории ежегодно в процессе эксплуатации, а также после каждого перемещения бокса.

Приложение 7.8
(справочное)
к СП "Безопасность работы
с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами"

1. Комиссия по контролю за соблюдением требований биологической безопасности в организации (далее - "Комиссия") является исполнительно - консультативным органом при руководителе учреждения, контролирующим порядок проведения работы с ПБА.

2. Комиссия создается в учреждениях, на базе которых проводятся любые виды работ с ПБА III - IV групп патогенности.

3. Комиссия в составе не менее 3 человек, компетентных в вопросах безопасности работы с ПБА, назначается приказом по учреждению сроком на 5 лет.

Председателем Комиссии назначается заместитель руководителя учреждения по эпидвопросам (науке) или специалист, имеющий соответствующие знания и опыт работы.

4. В своей деятельности Комиссия руководствуется настоящими Санитарными правилами, другими нормативными документами по обеспечению биологической безопасности.

5. Комиссия по административной линии подчиняется руководителю учреждения.

6. В целях обеспечения безопасности работы с ПБА Комиссия решает следующие задачи:

- организация и проведение постоянного контроля за соблюдением регламентированного порядка обеспечения биологической безопасности в учреждении;

- организация и проведение комплекса мероприятий, направленных на предупреждение аварийных ситуаций и ликвидацию их последствий;

- контроль за подготовленностью сотрудников к работе с инфекционным материалом и организация наблюдения за состоянием их здоровья;

- осуществление контроля за выполнением требований соответствующих нормативных документов, а также распоряжений руководителя учреждения и предложений Комиссии;

- проведение анализа состояния биологической безопасности и разработка комплекса мер по ее совершенствованию;

- подготовка отчетной и другой документации по вопросам биологической безопасности.

7. В соответствии с возложенными на нее задачами Комиссия проводит следующий комплекс мероприятий:

- осуществляет плановый, не реже 2-х раз в год, и периодический внеплановый контроль за выполнением регламентированного порядка обеспечения биологической безопасности;

- в случае "аварии" при работе с ПБА разрабатывает и представляет руководителю учреждения план мероприятий по ликвидации ее последствий;

- проводит анализ установленных нарушений правил безопасности, предпосылок к этому, причин аварий и представляет руководителю учреждения план мероприятий по повышению эффективности системы биологической безопасности;

- оформляет необходимую документацию для получения (продления) разрешения на проведение работы с ПБА;

- проводит проверку знаний по вопросам обеспечения биологической безопасности персонала, работающего с ПБА;

- готовит отчет о работе Комиссии за год и представляет его в организации, осуществляющие надзорные функции;

- имеет план работы, утвержденный руководителем учреждения, нормативные и другие документы, необходимость которых определяется ее задачами и функциями.

8. В целях эффективной реализации своих задач Комиссия имеет следующие права:

- требовать от руководителей подразделений и отдельных лиц безусловного выполнения правил биологической безопасности, а также ходатайствовать перед руководителем учреждения об устранении имеющихся нарушений;

- проводить самостоятельно или с привлечением других квалифицированных специалистов плановые и внеплановые проверки соблюдения правил биологической безопасности в учреждении;

- ходатайствовать перед руководителем учреждения о приостановлении работы с биологическим материалом в случае невозможности выполнения правил биологической безопасности или их систематического нарушения, а также о приостановлении или лишении допуска к работе с биологическим материалом отдельных лиц;

- рассматривать документы и давать заключения по вопросам биологической безопасности;

- заслушивать на заседании Комиссии руководителей подразделений и других сотрудников о выполнении требований биологической безопасности;

- ходатайствовать перед руководителем учреждения о привлечении к административной ответственности лиц за нарушение установленных правил безопасной работы с ПБА.