Законодательная база Российской Федерации

"СБОР, УЧЕТ И ПОДГОТОВКА К ЛАБОРАТОРНОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ КРОВОСОСУЩИХ ЧЛЕНИСТОНОГИХ - ПЕРЕНОСЧИКОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.1.1027-01" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 06.04.2001)

Подготовку эктопаразитов к исследованию проводят в специальном боксе или бактериологической комнате лаборатории, где для этого оборудуют отдельный стол. Эктопаразитов перед сортировкой или определением слегка усыпляют эфиром. Экспозиция анестезии не должна превышать 2 мин. Сортируют членистоногих в чашках Петри, разбирая по группам: блохи, иксодовые, гамазовые клещи, вши и т.д. При подготовке материала к исследованию на туляремию необходимо каждый сбор разбирать в стерильной чашке Петри или обжигать ее, а также инструменты после каждого сбора. Перед исследованием эктопаразитов, по возможности, определяют до вида. Обязательному определению подлежит материал, поступающий со стационара. При определении подсчитывают блох по видам и полу, регистрируют, если нужно, физиологические показатели (самок с яйцами, степени развития жирового тела, стадии переваривания крови); у иксодовых клещей отмечают фазы развития, отделяют пивших особей от голодных и отбраковывают непитавшихся личинок, непригодных для бактериологического исследования. Попутно с определением или в процессе сортировки эктопаразитов группируют в пробы. В них включают определенное число особей, добытых с одного адреса ("точки") или однотипных объектов. На пробирках указывают номер посева, дату.

При исследовании на чуму в одну пробу включают по 20 - 30 (не более 50) блох или мелких клещей, вшей. Иксодовых клещей исследуют отдельно по фазам развития и в одну пробу берут пивших самок не более 3, голодных - до 30; нимф пивших - до 15, голодных - до 50; личинок пивших - до 30.

При исследовании на туляремию в одну пробу объединяют до 50 имаго иксодовых клещей, 50 - 100 их нимф и 100 - 200 личинок. Блох, гамазовых клещей, вшей исследуют до 100 особей в пробе. Из кровососущих двукрылых группируют пробы, включая в одну до 100 комаров, до 250 мошек и 20 - 25 слепней (у них предварительно отстригают ноги и крылья).

Особые требования предъявляются к материалу, доставляемому на вирусологическое исследование. Кровососущих двукрылых доставляют в лабораторию в жидком азоте, остальных членистоногих - в жидком азоте или живыми. Обычно первичную обработку материала проводят в полевых условиях. Живых комаров обездвиживают табачным дымом и определяют до вида (если это возможно) или 10% сбора комаров складывают в отдельные флаконы с ватой (или на матрасике) для последующего определения. Комаров, предназначенных для исследования, группами по 100 - 200 особей помещают в пластиковые пробирки и ставят в жидкий азот, где хранят до исследования. Мошек, мокрецов собирают, хранят и транспортируют так же, но в пробы берут от 200 до 400 особей в зависимости от объема собранного материала. В случае обработки сборов в лабораторных условиях их разборка проводится на охлажденной поверхности.

Из иксодовых клещей, если их доставляют в жидком азоте, формируют группы из 10 - 50 особей (одного вида, фазы развития, с учетом объекта и места сбора). При большом материале количество экземпляров в группах должно быть одинаковым. Иксодовых клещей, доставляемых в живом виде, содержат в прохладном месте (погребе, холодильниках) в специально оборудованных пробирках (влажных камерах). В такую пробирку наливают воды на 1/3 - 1/4 объема и плавным движением вплотную к воде вводят ватный тампон. Вслед за ватным вставляют ватно-марлевый тампон, плотно прилегающий к стенкам пробирки. Расстояние между этими тампонами составляет 5 мм. К концу ватно-марлевого тампона привязывают крепкую нитку, один конец которой выступает из пробирки на 3 - 4 см, она служит для извлечения ватно-марлевого тампона и находящихся на нем клещей наружу. Внутрь пробирки можно поместить гармошку из фильтровальной бумаги. Пробирку закрывают ватно-марлевой пробкой. Пробирки и материал, по возможности, должны быть стерильными. Непродолжительное время (до недели) иксодовые клещи могут сохраняться живыми в обычных пробирках с травой или мхом в прохладном месте. Живых аргасовых клещей можно содержать в пробирках, на дно которых помещают сложенную "гармошкой" фильтровальную бумагу.

Количество гамазовых клещей, блох в пробе не должно превышать 100 экземпляров. Если их определение не проводят, то 10 - 15% сбора этих эктопаразитов фиксируют в 70°-ном спирте для дальнейшей камеральной обработки.

Эктопаразиты, поступившие в лабораторию в консервирующей жидкости, разборке не подлежат, так как она также проводится на месте сбора перед помещением в консервирующую жидкость. Их передают на исследование в пробирках, в которых они были доставлены. Все необходимые для исследования сведения отражаются в сопроводительной этикетке.

Вскрытие членистоногих может проводиться с целью определения их физиологического возраста или зараженности тем или иным возбудителем. Членистоногих вскрывают на стерильном предметном стекле (лучше с лункой), помещенном в чашку Петри, в капле физиологического раствора. Комаров вскрывают в капле воды. Препаровальные иглы держат в стакане со спиртом и периодически обжигают. На дно стакана кладут вату, чтобы иглы не тупились. Членистоногих предварительно слегка усыпляют эфиром и 1 - 2 сек. промывают в 96°-ном спирте.

При вскрытии блох острой левой иглой фиксируют голову или грудь блохи. Правой лопатовидной иглой надрезают хитин между 2 и 3 члениками груди с брюшной и спинной сторон. Затем правой иглой отсекают часть хитина позади пигидия, отделяя конец задней кишки. Придерживая правой иглой блоху за брюшко, а левой за голову, потягиванием левой иглой кпереди через просвет между члениками извлекают желудочно-кишечный тракт и отделяют его от грудных сегментов.

Клеща при вскрытии придерживают левой рукой с помощью тупой иглы или пинцета. Правой рукой острой лопатовидной иглой отсекают край тела по всей окружности. Этот способ применим к аргасовым клещам, голодным иксодовым. У крупных сытых иксодовых клещей осторожно надрезают бок тела, вводят в появившуюся щель ножницы и разрезают хитин по окружности тела. В этот момент клеща лучше прикалывать к восковому дну препаровальной ванночки и избегать разбрызгивания внутреннего содержимого. У вскрытого клеща приподнимают дорзальные покровы и извлекают внутренности брюшка. Возможно разрезание копьевидной иглой кожных покровов брюшка, но делать это надо осторожно, избегая разбрызгивания, лучше под прикрытием чашки Петри.

У комаров перед вскрытием отрезают крылья и ноги. Придерживая препаровальной иглой брюшко, копьевидной иглой рассекают тело комара примерно посредине грудного отдела. В задней части тела остаются желудочно-кишечный тракт, мальпигиевы сосуды и половые железы, в передней - глотка, пищевод и слюнные железы. Для извлечения органов брюшка надрывают хитиновый покров между 2 и 3 сегментами, считая от его заднего конца. Затем одну иглу втыкают в грудь, другую - в конец брюшка и осторожно раздвигают их в разные стороны. Покровы брюшка легко снимаются с внутренних органов, которые прикреплены к его последнему сегменту. Слюнные железы можно отпрепарировать сходным образом, т.е. надо разорвать хитиновый покров за головой комара и двумя иглами, воткнутыми одна в грудь, другая - в голову, разъединить эти отделы. При другом способе у комара отсекают голову, надавливают иглой плашмя на грудь комара и проводят ею кпереди. В любом случае из надреза выступает беловатый комочек, в котором обнаруживаются слюнные железы. Определение физиологического возраста комаров проводят на основании изменения трахейной системы желудка и яичников самок. Описанными методами препарируют и других кровососущих двукрылых.