Законодательная база Российской Федерации

"КОФЕ НАТУРАЛЬНЫЙ РАСТВОРИМЫЙ. ОБЩИЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ. ГОСТ Р 51881-2002" (утв. Постановлением Госстандарта РФ от 02.04.2002 N 122-ст)

Б.7.1 Подготовка анализируемого образца

Б.7.1.1 Рассчитывают массовую долю сухого вещества в анализируемом образце после определения массовой доли влаги - по ГОСТ 15113.4 или ИСО 3726.

Б.7.1.2 Навеску натурального растворимого кофе массой (0,500±0,001) г помещают в химический стакан вместимостью 100 см3(Б.5.4.1), добавляют 5 см3 раствора аммиака (Б.4.4) и помещают в кипящую водяную баню (Б.5.4.2) на 2 мин. После охлаждения раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 (Б.5.4.3) и дистиллированной водой доводят объем до метки, тщательно перемешивают и охлаждают до комнатной температуры. С помощью пипетки (Б.5.4.4) отбирают 2 см3 полученного раствора, помещают в химический стакан вместимостью 100 см3(Б.5.4.1), добавляют 3 г диатомовой земли (Б.4.3) и тщательно перемешивают.

Б.7.1.3 Навеску декофеинизированного растворимого кофе массой (0,500±0,001) г помещают в химический стакан вместимостью 100 см3(Б.5.4.1), добавляют 5 см3 раствора аммиака (Б.4.4) и помещают в кипящую водяную баню (Б.5.4.2) на 2 мин. Добавляют 6 г диатомовой земли (Б.4.3) и тщательно перемешивают.

Б.7.2 Определение массовой доли кофеина

Б.7.2.1 Заполнение колонок

Б.7.2.1.1 Колонка 1 (щелочная) (рисунок Б.1)

Тщательно перемешивают 3 г диатомовой земли (Б.4.3) с 2 см3раствора едкого натра (Б.4.2) до получения однородной смеси. (Материал для заполнения колонки может быть подготовлен заранее и храниться в закрытых емкостях. Для каждой щелочной колонки требуется 5,16 г смеси). Полученный влажный порошок переносят частями, примерно по 2 г, в хроматографическую колонку диаметром 21 мм (Б.5.1), нижняя часть которой заполнена набивкой их хлопковой ваты или стекловаты. Без особого усилия уплотняют смесь после каждого добавления материала, применяя для этого стеклянную палочку, до образования однородного и плотного слоя.

Переносят в щелочную колонку слой смеси, подготовленной по Б.7.1.2 или Б.7.1.3. Для исключения потерь кофеина химический стакан дважды очищают порциями диатомовой земли по 1 г и также помещают в щелочную колонку. Поверх кладут слой хлопковой ваты или стекловаты.

Б.7.2.1.2 Колонка 2 (кислотная) (рисунок Б.1)

1 - колонка 1 (щелочная) длиной 250 мм; 2 - хлопковая вата или стекловата; 3 - смесь диатомовой земли и анализируемого образца; 4 - 3 г диатомовой земли и 2 см3 NaOH (5,16 г); 5 - хлопковая вата или стекловата; 6 - кран, предпочтительно из политетрафторэтилена; 7- колонка 2 (кислотная) длиной 250 мм; 8 - стекловата; 9 - 3 г диатомовой земли и 3 см3 H2SO4 (6,36 г)

Рисунок Б.1 - Колонки для определения массовой доли кофеина

Тщательно перемешивают 3 г диатомовой земли (Б.4.3) с 3 см3раствора серной кислоты (Б.4.1) до получения однородной смеси. (Материал для заполнения колонки может быть подготовлен заранее и храниться в закрытых емкостях. Для каждой кислотной колонки требуется 6,36 г смеси). Полученный влажный порошок переносят частями, примерно по 3 г, в хроматографическую колонку диаметром 17 мм (Б.5.1), нижняя часть которой заполнена набивкой из стекловаты. Без особого усилия уплотняют смесь после каждого добавления материала, применяя для этого стеклянную палочку, до образования однородного и плотного слоя. Поверх кладут слой стекловаты.

Б.7.2.1.3 Очистка и извлечение кофеина

Устанавливают колонки одну над другой так, чтобы жидкость из щелочной колонки прямо стекала в кислотную колонку. Пропускают постепенно 150 см3 диэтилового эфира (Б.4.5) через обе колонки.

Кран колонки 2 регулируют так, чтобы на поверхности содержимого в колонке остался тонкий слой жидкости. После этого колонку 1убирают, а через колонку 2 пропускают еще 50 см3 диэтилового эфира. Вытекающую из колонки 2 жидкость сливают в отходы. (Используемый диэтиловый эфир может быть восстановлен взбалтыванием его с сернокислым железом).

Избыточное количество диэтилового эфира удаляют с помощью вакуум-насоса или резиновой груши до тех пор, пока не прекратится стекание капель диэтилового эфира из колонки, и выходящий из крана воздух не будет нести лишь слабый запах диэтилового эфира.

Для извлечения кофеина через колонку 2 пропускают 45-50 см3 хлороформа (Б.4.7), который собирают в мерную колбу вместимостью 50 см3 с одной меткой (Б.5.4.3), и доводят объем до метки хлороформом. Полученную смесь тщательно перемешивают.

Краны колонок регулируют так, чтобы скорость жидкости (хлороформа и диэтилового эфира) не превышала 3 см3/мин и обеспечивала равномерное прохождение жидкости через все содержимое колонок.

Во избежание вдыхания паров растворов диэтилового эфира и хлороформа и возможности взрыва их добавление должно проводиться в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу.

Б.7.2.2 Спектрометрические измерения

Б.7.2.2.1 Спектрометрическое измерение анализируемого раствора

На спектрофотометре (Б.5.2) измеряют оптическую плотность полученного раствора в кварцевой кювете (Б.5.3) по отношению к чистому насыщенному водой хлороформу при длине волны 276 нм, соответствующей максимуму спектра поглощения кофеина, и при длинах волн на 30 нм выше и ниже этого значения - для подтверждения чистоты полученного кофеина.

Если максимальная оптическая плотность превышает предел измерений используемого прибора, необходимо повторить измерение на разбавленном растворе кофеина в хлороформе. Проведенное разбавление необходимо учитывать при расчете содержания кофеина (раздел 8). Если максимальная измеренная оптическая плотность менее 0,2, следует повторить анализ, используя большую навеску анализируемого образца натурального растворимого кофе.

Б.7.2.2.2 Подготовка и спектрометрическое измерение контрольного раствора

Навеску чистого кофеина (Б.4.6) массой (0,100±0,001) г помещают в мерную колбу с одной меткой вместимостью 1000 см3(Б.5.4.3), растворяют в хлороформе и доводят до метки. Пипеткой (Б.5.4.4) отбирают 5,0 см3 полученного раствора, помещают в мерную колбу с одной меткой вместимостью 50 см3 (Б.5.4.3) и доводят хлороформом до метки.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора согласно Б.7.2.2.1. Скорректированная оптическая плотность контрольного раствора (раздел 8) должна быть около 0,4.

Б.7.3 Контрольный анализ

Контрольный анализ проводят на реактивах, используя описанную выше процедуру, но без анализируемого образца.

Перед использованием повторно очищенных хроматографическим способом реактивов (Б.4.5 и Б.4.7) повторяют контрольный анализ для оценки их чистоты.