Законодательная база Российской Федерации

"МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.796-99" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.12.99)

Наибольшее количество личинок стронгилят обнаруживают в прикорневой части травы, в 3 - 5 см от почвы. Для выявления личинок нематод применяют метод Бермана. Собранную на пастбище траву (0,5 - 1 кг на пробу) перед закладкой в аппарат Бермана ножницами разрезают на части (для исследования используют нижнюю часть растений). Аппарат с травой и теплой водой оставляют на 1 - 2 часа. Затем пробирки с осадком центрифугируют 1 - 2 минуты при 800 об./мин., надосадочный слой жидкости сливают, а осадок микроскопируют на предметном стекле.

Сено, взятое из стога, исследуют аналогично.

Метод позволяет исследовать пробы трав большой массы, что увеличивает вероятность выявления личинок стронгилят.

Оборудование: сита диаметром 31 см, высотой боковой стенки 12 см (сетка из нержавеющей проволоки, размер ячеек 1 мм), сетку укрепляют на уровне 2 см от нижнего края сита, тазы диаметром 36 см (по верхнему краю), высотой 15 см, книзу таз постепенно сужается. При внесении в таз сита нижний край последнего упирается в сужение таза. Между сеткой сита и дном таза создается пространство высотой 5 см, стеклянные воронки диаметром 18 - 20 см (по верхнему краю) с резиновыми трубками и пробирками на концах, штатив для воронок, пробирки, пипетки (глазные), раствор Люголя для фиксации личинок, предметные стекла, цилиндры, микроскоп.

Ход исследования. В тазы ставят сита и заполняют водой комнатной температуры. Уровень воды не должен доходить до верхнего края таза на 1 - 1,5 см. Образовавшиеся под сеткой пузырьки воздуха удаляют резким движением сита вверх-вниз. В каждое сито с водой вносят 100 - 120 г травы. Продолжительность выделения личинок - сутки. Для сбора личинок, осевших на дно таза, осторожно удаляют сита с травой. Через 15 - 20 минут после удаления сита надосадочную жидкость сливают, оставляя на дне таза около 1 - 1,5 л. Жидкость перемешивают и вместе с осадком переливают в воронки с пробирками на концах. Отстаивание личинок в воронках продолжается 1 - 2 часа. Остальной ход исследования проводят обычным способом. Личинки подсчитывают при малом увеличении микроскопа. В каплю воды с личинками для обезвоживания последних вносят одну каплю раствора Люголя. При обилии личинок в осадке для их подсчета применяют способ разведений.

Пробы трав собирают в биотопах моллюсков. Для отбора проб водных растений с адолескариями желательно пользоваться лупой. Адолескарий можно заметить даже невооруженным глазом на листьях и стеблях растений. Их обнаруживают преимущественно на нижней и реже верхней поверхности листьев, черешках листьев и стеблях растений. Они встречаются одиночно и группами. В лаборатории с помощью иглы и скальпеля освобождают адолескарии и изучают на предметном стекле в капле физиологического раствора.

Адолескария фасциолы внешне представляет округлое образование диаметром около 0,3 мм, прикрепившееся к растению, покрытое двумя оболочками. Если адолескария живая, то внутри цисты личинка может свободно двигаться. Это чаще наблюдается, если адолескарию поместить в каплю теплой воды (37 - 38 °С). При микроскопировании видны почти одинаковые по размеру ротовая и брюшная присоски, глотка, два кишечных ствола, продолжающиеся до конца тела и экскреторный пузырь. Молодые адолескарии молочно-белого цвета, позднее они желтеют, а затем темнеют до буро-коричневого цвета. Адолескарии фасциолы гигантской по форме и размеру не отличаются от обыкновенной (рис. 1 - не приводится).

Адолескарии парамфистомат сходны с таковыми фасциол, замечаются в виде блестящих черных или коричневых точек. Тело полусферической формы, снаружи покрыто слоистой светлой оболочкой, диаметр 0,23 - 0,26 мм. Внутри цисты - подвижная личинка с теми же органами (глазки, фаринкс, брюшная присоска, экскреторные сосуды и пузырь), что и у церкария. При этом брюшная присоска очень крупная, ротовая, наоборот, рудиментарная или слабо развита.

Для сбора адолескарий фасциолы используют стекла размером 18 х 13 см, толщиной 1,5 мм (можно куски плексиглаза размером 16 х 7 см, толщиной 1,2 мм), которые ставят вертикально, закрепляют нижнюю часть на 2 - 3 см в грунт водоема и оставляют на 7 суток. Затем их проверяют и при необходимости заменяют другими. Церкарии, встречая на своем пути стекла, прикрепляются к ним и инцистируются, превращаясь в адолескарий. Стекла просматривают невооруженным глазом. При наличии белых точек (возможно адолескарии) их исследуют под лупой. Стекла ставят в мочажины, временные водоемы, где обитают малые прудовики. Плоскости стекол должны быть обращены с востока на запад.