Законодательная база Российской Федерации

ПРИКАЗ Минздрава СССР от 02.09.85 N 1161 "О СОВЕРШЕНСТВОВАНИИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА" (вместе с "ИНСТРУКЦИЕЙ ПО ПОСТАНОВКЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ НА СИФИЛИС")

Принцип

Реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом вступают в соединение с липидным антигеном (антиген Кана). Образующийся комплекс антиген-антитело выпадает в осадок в виде макрофлокулята.

Оборудование

Холодильник с температурой 4-6°.

Термостат с температурой 37°.

Центрифуга.

Инактиватор с температурой 56°.

Аппарат для встряхивания (шуттель-аппарат).

Пробирки размером 11 x 75 мм.

Пипетки градуированные 0,1 и 0,2 мл с делениями на 0,001.

Пипетки градуированные на 1, 2 мл с делениями на 0,01.

Пипетки градуированные 5, 10 мл с делениями на 0,1.

Стеклянные стаканчики емкостью 20, 50 мл.

Банки стеклянные емкостью 50, 100, 200 мл.

Ингредиенты

0,9% изотонический раствор натрия хлорида. В 1 литре дистиллированной воды растворяют 9 г натрия хлорида, химически чистого. Раствор фильтруют через бумажный фильтр.

Антиген Кана. Антиген разводят по титру способом, указанным на этикетке. Хранят в темном месте при комнатной температуре во флаконах или пробирках плотно закрытых корковыми пробками.

Испытуемая сыворотка крови. Взятие крови, получение сыворотки крови и обработка испытуемой сыворотки крови производится также, как для реакции Вассермана.

Методика постановки реакции

Подготовительная работа

Приготовление 0,9% изотонического раствора натрия хлорида, сливание испытуемых сывороток крови со сгустка, их инактивация, разведение антигена по титру.

Расход ингредиентов на 100 исследований

Натрий хлорид, х. ч. - 9 г.

Антиген Кана - 1,8 мл.

Приготовление разведения антигена

Антиген разводят по титру, указанному на этикетке, который, как правило, бывает 1+1, 1+1,1, 1+1,2, 1+1,3, т.е. на каждый 1 мл антигена добавляют 1 мл, 1,1 мл, 1,2 мл, 1,3 мл 0,9% изотонического раствора натрия хлорида. Для приготовления разведенного антигена в низкий стеклянный стаканчик отмеривают необходимый для данного рабочего дня объем 0,9% изотонического раствора натрия хлорида, во второй стеклянный стаканчик - необходимое количество антигена Кана. Для отмеривания антигена Кана обязательно пользоваться сухой пипеткой. Затем 0,9% изотонический раствор натрия хлорида быстро вливают в антиген и смесь перемешивают, переливая из стаканчика в стаканчик 6-7 раз. Разведенный антиген оставляют на 10 минут при комнатной температуре (созревание). Созревшая антигенная эмульсия пригодна в течение 15 минут. Поэтому при большом количестве исследуемых сывороток крови рекомендуется готовить разведение отдельными порциями.

Основной опыт

В пробирку, опущенной на дно градуированной пипеткой (на 0,1 или 0,2 мл), вносят 0,025 мл разведенного антигена. Затем приливают 0,15 мл исследуемой инактивированной сыворотки крови и встряхивают на шуттель-аппарате 3 минуты, затем приливают 0,5 мл 0,9% изотонического раствора натрия хлорида и вновь встряхивают до полного перемешивания содержимого пробирки. Для опыта ставят 4 контроля: контроль антигена, контрольные положительную, слабо-положительную и отрицательную сыворотки крови (табл. N 9).

Таблица N 9

Методика постановки реакции Кана

Оценка результатов

Определение результатов реакции Кана производят непосредственно после добавления 0,9% изотонического раствора натрия хлорида невооруженным глазом или при помощи лупы или агглютиноскопа. Для обозначения степени позитивности реакции Кана пользуются системой четырех плюсов: выпадение крупных хлопьев, жидкость прозрачная - 4+, резко положительная реакция; образование ясного преципитата со значительным просветлением жидкости - 3+, положительный результат реакции, образование преципитата со взвешенными мелкими частицами в мутноватой жидкости - 2+, слабо положительная реакция; мелкие частицы взвешены в мутной жидкости - 1+, сомнительная реакция; отсутствие взвешенных частиц в прозрачной опалесцирующей жидкости в опытной пробирке, в пробирках с контролем антигена и заведомо отрицательной сывороткой крови регистрируют как отрицательный результат реакции Кана.

Источники ошибок

Нарушение условий и методики постановки реакции.

Нарушение условий и срока хранения испытуемых сывороток крови, антигена.

Изменение процентного содержания натрия хлорида.

Исключение из постановки реакции контрольных положительной, слабоположительной и отрицательной сывороток крови.

Использование загрязненной лабораторной посуды и пипеток.