Законодательная база Российской Федерации

"МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВНЕДРЕНИЮ И ПРИМЕНЕНИЮ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ПРАВИЛ И НОРМАТИВОВ САНПИН 2.1.4.1116-02 "ПИТЬЕВАЯ ВОДА. ГИГИЕНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К КАЧЕСТВУ ВОДЫ, РАСФАСОВАННОЙ В ЕМКОСТИ. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА". МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 2.1.4.1184-03" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 15.01.2003)

Приложение 1
(справочное)

Питьевые (пресные) воды:

- нативные (природные);

- скорректированные по хим. составу, органолептическим и физическим свойствам;

- полученные искусственным путем.

Минеральные воды (солоноватые, соленые, рассолы):

- нативные (природные);

- скорректированные по хим. составу и органолептическим свойствам.

Обессоленные (ультрапресные) воды:

- нативные;

- полученные искусственным путем.

Расфасованные питьевые воды должны обеспечить население не только питьевой водой, полностью отвечающей санитарным правилам и нормам, но и водой, специально предназначенной для сохранения и укрепления здоровья, что особенно важно для наиболее уязвимых, "критических" групп населения. Вода, содержащая оптимальные уровни биологически необходимых макроэлементов (кальция, магния, фосфатов) и некоторых микроэлементов (селен, калий, цинк, йод, фтор и др.), полезна и необходима детям, особенно в раннем возрасте, беременным, а также лицам пожилого возраста. Лица, страдающие хроническими заболеваниями печени и почек, нуждаются в воде, не только скорректированной по солевому составу, но и практически не содержащей токсичные вещества. Детям с гипертензивным синдромом, согласно рекомендациям ВОЗ, показано не только регламентированное потребление соли, но и ограничение содержания натрия и хлоридов в питьевой воде. Огромную проблему для 85% населения России представляют йодо- и фтородефициты и связанная с ними эндокрино- и стоматологическая патология. Почти повсеместно отмечено нарастание дефицита поступления в организм как детского, так и взрослого населения солей кальция и других биогенных элементов.

Приложение 2
(обязательное)

                ФОРМА ПРОТОКОЛА ИСПЫТАНИЙ ОБРАЗЦОВ\r\n               ИСХОДНОЙ ("СЫРЬЕВОЙ") ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ\r\n                    ДЛЯ ПРОМЫШЛЕННОГО РОЗЛИВА\r\n \r\n     Полное наименование испытательного центра (лаборатории),\r\n         N аттестата аккредитации в системе ЦГСЭН МЗ РФ,\r\n                       адрес, телефон/факс\r\n \r\n                            ПРОТОКОЛ N\r\n \r\n                                             от "день, месяц, год"\r\n \r\n    Результаты физико-химического,            микробиологического,\r\nпаразитологического,               радиологического              и\r\nэкспресс-токсикологического анализа пробы воды ("сырьевой")\r\n \r\n1. Наименование      предприятия,      организации     (заявитель)\r\n__________________________________________________________________\r\n2. Юридический адрес _____________________________________________\r\n3. Место взятия пробы (место нахождения водоисточника, N скважины)\r\n__________________________________________________________________\r\n4. Наименование пробы ____________________________________________\r\n5. Дополнительные  сведения (для подземных источников:  водоносный\r\nгоризонт,  интервал  опробования;   для   водопроводных   вод   из\r\nповерхностных источников: технология водоподготовки) _____________\r\n6. Условия отбора ________________________________________________\r\n7. Дата и время отбора ___________________________________________\r\n8. Кем отобрана проба ____________________________________________\r\n9. Условия доставки ______________________________________________\r\n10. Специфические вещества, характерные для местных условий ______\r\n__________________________________________________________________\r\n \r\n                                                           Таблица\r\n 

N п/п 

Показатели 

Единицы 
измерения 

Результаты 
анализа 
пробы воды 

Метод 
анализа 

    1 

             2 

           3 

     4 

     5 

         I. Органолептические показатели 

1 

Запах 

баллы 

2 

Привкус 

-"-

3 

Цветность 

град. 

4 

Мутность 

ЕМФ 
(единицы 
мутности по 
формазину) 

5 

Водородный показатель 

pH 

                 II. Солевой и газовый состав 

6 

Общая минерализация 

мг/л 

7 

Сухой остаток 

-"-

8 

Щелочность 

мг-экв./л 

9 

Жесткость 

мг-экв./л 

10 

Кальций (Ca) 

мг/л 

11 

Магний (Mg) 

-"-

12 

Калий (K) 

-"-

13 

Натрий (Na) 

-"-

14 

Бикарбонаты (HCO3) 

-"-

15 

Фторид-ион (F) 

-"-

16 

Хлориды (Cl ) 

-"-

17 

Сульфаты (SO4 ) 

-"-

18 

Фосфаты (PO4) 

-"-

19 

Силикаты (по Si) 

-"-

20 

Нитраты (по NO3) 

-"-

21 

Цианиды (по CN ) 

-"-

22 

Кислород (O2) 

-"-

23 

Углекислота 
свободная (CO2) 

-"-

24 

Сероводород (H2S) 

-"-

         III. Показатели органического загрязнения 

25 

Окисляемость 
перманганатная 

мг O2/л 

26 

Нитриты (по NO2) 

мг/л 

27 

Аммиак и аммоний-ион (NH4) 

-"

28 

Общий углерод 

-"-

29 

Органический углерод 

-"-

30 

Неорганический углерод 

-"-

31 

ПАВ (анионоактивные) 

-"-

32 

Нефтепродукты 

-"-

33 

Фенолы летучие, суммарно 

мкг/л 

34 

Хлороформ 

-"-

35 

Бромоформ <1> 

-"-

36 

Дибромхлорметан <1> 

-"-

37 

Бромдихлорметан <1> 

-"-

38 

1,2-дихлорэтан <2> 

-"-

39 

1,1-дихлорэтилен <2> 

-"-

40 

Тетрахлорэтилен <2> 

-"-

41 

Трихлорэтилен <2> 

-"-

42 

Дихлорметан <2> 

-"-

43 

Четыреххлористый углерод 

-"-

44 

Формальдегид 

-"-

45 

Бенз(а)пирен 

мкг/л 

46 

Ди(2-этилгексил)фталат 

-"-

47 

Гексахлорбензол 

-"-

48 

Линдан (гамма-изомер ГХЦГ) 

-"-

49 

2,4-Д 

-"-

50 

Гептахлор 

-"-

51 

ДДТ (сумма изомеров) 

-"

52 

Атразин 

-"-

53 

Симазин 

-"-

                        IV. Металлы 

54 

Алюминий (Al) 

мг/л 

55 

Барий (Ba) 

-"-

56 

Берилий (Be) 

-"-

57 

Железо (Fe, суммарно) 

-"-

58 

Кадмий (Cd, суммарно) 

-"-

59 

Кобальт (Co) 

-"-

60 

Литий (Li) 

-"-

61 

Марганец (Mn) 

-"-

62 

Медь (Cu, суммарно) 

-"-

63 

Молибден (Mo, суммарно) 

-"-

64 

Никель (Ni, суммарно) 

-"-

65 

Ртуть (Hg, суммарно) 

-"-

66 

Селен (Se) 

-"-

67 

Серебро (Ag) 

-"-

68 

Свинец (Pb, суммарно) 

-"-

69 

2+ Стронций (Sr ) 

-"-

70 

Сурьма (Sb) 

-"-

71 

6+ Хром (Cr ) 

-"-

72 

2+ Цинк (Zn ) 

-"-

                    V. Галогены 

73 

Бромид-ион 

мг/л 

74 

Хлор остаточный свободный 

-"-

75 

Хлор остаточный связанный 

-"-

76 

Озон 

-"-

77 

Йодид-ион 

-"-

                 VI. Неметаллические элементы 

78 

Бор (B) 

мг/л 

79 

Мышьяк (As) 

-"-

                VII. Микробиологические показатели 

80 

Глюкозоположительные 
колиформные бактерии <3> 

КОЕ/100 мл 

81 

Общие колиформные бактерии 

КОЕ/100 мл 

82 

Термотолерантные 
колиформные бактерии 

КОЕ/100 мл 

83 

ОМЧ при температуре 37 °C 

КОЕ/мл 

84 

ОМЧ при температуре 22 °C 

КОЕ/мл 

85 

E. coli 

КОЕ/100 мл 

86 

Споры сульфитредуцирующих 
клостридий <4> 

КОЕ/100 мл 

87 

Энтерококки 

КОЕ/100 мл 

88 

Колифаги 

КОЕ/100 мл 

89 

Патогенные бактерии 
кишечной группы 

1000 мл 

90 

Энтеровирусы 

10 л 

            VIII. Паразитологические показатели <3> 

91 

Ооцисты криптоспоридий 

кол-во в 50 л 

92 

Цисты лямблий 

кол-во в 50 л 

93 

Яйца гельминтов 

кол-во в 50 л 

            IX. Показатели радиоактивного загрязнения 

94 

Удельная суммарная 
альфа-радиоактивность 

Бк/л 

95 

Удельная суммарная 
бета-радиоактивность 

-"-

               X. Биотестирование 

96 

Дафнии (время выживаемости) 

часы 

97 

Инфузории 

К токс. 

98 

Эколюм (бактерии) 

Степень изменения 
свечения, % 

99 

Тест Эймса на 
Salmonella thyphimurium 
(суммарная мутагенная 
активность) 

Уровень суммарной 
мутагенной активности 

                XI. Коррозионная активность 

100 

П1 

Единицы 

101 

П2 

-"-

                 XII. Комплексные показатели 

102 

По SUM NO2 и NO3 

Единицы 

103 

По SUM тригалометанов 

-"-

104 

По SUM ХОС 

-"-

 \r\n
\r\n    <1> Анализ  выполняется  только  в  пробах  питьевой  воды  из\r\nцентрализованных систем питьевого водоснабжения.\r\n    <2> Указанные  показатели  являются рекомендуемыми до внесения\r\nизменений в СанПиН 2.1.4.1074-01.\r\n    <3> Анализ   выполняется   только   в  пробах  воды  подземных\r\nводоисточников.\r\n    <4> Анализ  выполняется  только  в  пробах  воды поверхностных\r\nисточников питьевой  воды  из  централизованных  систем  питьевого\r\nводоснабжения из поверхностных источников.\r\n \r\n    Примечание. В  случае невозможности выполнения полного анализа\r\nна базе испытательного центра исследования по  отдельным  разделам\r\nвыполняются  в  других  аккредитованных на данный вид исследований\r\nлабораториях  (центрах).  При  этом  форма  протокола   аналогична\r\nпредставленной.\r\n \r\nФ.И.О., должность специалистов, проводивших исследования:\r\n \r\nДата выполнения анализа "__" __________ ____ г.\r\n \r\n                            Заключение\r\n \r\nРуководитель испытательной\r\nлаборатории                    (Ф.И.О.)\r\n \r\n \r\n 

Приложение 3
(обязательное)

ФОРМА ПРОТОКОЛА ИСПЫТАНИЙ ПИТЬЕВЫХ ВОД,\r\n РАСФАСОВАННЫХ В ЕМКОСТИ\r\n \r\n Полное наименование испытательного центра (лаборатории),\r\n N аттестата аккредитации в системе ЦГСЭН МЗ РФ\r\n или в системе ГОСТ Р, адрес, телефон/факс\r\n \r\n ПРОТОКОЛ N ____\r\n \r\n от "день, месяц, год"\r\n \r\n РЕЗУЛЬТАТЫ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОГО,\r\n МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО И ЭКСПРЕСС-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО\r\n АНАЛИЗА ПРОБЫ РАСФАСОВАННОЙ ВОДЫ ПРИ ХРАНЕНИИ\r\n В РАЗЛИЧНЫХ ТЕМПЕРАТУРНЫХ УСЛОВИЯХ\r\n \r\nНаименование предприятия, организации (заявитель) ________________\r\nЮридический адрес ________________________________________________\r\nНаименование продукции ___________________________________________\r\nДата розлива _____________________________________________________\r\nДата и время отбора ______________________________________________\r\nКем отобрана проба _______________________________________________\r\nУсловия доставки _________________________________________________\r\n \r\n Таблица\r\n

N п/п 

Показатели 

Единицы
измерения

Результат 
анализа 
пробы воды 
при 
температуре 
хранения, °C 

Метод 
анализа

+4 

+22 

+37 

   1 

          2 

      3 

      4 

   5 

   6 

   7 

            I. Органолептические показатели 

1 

Запах 

баллы 

2 

Привкус 

-"-

3 

Цветность 

град. 

4 

Мутность 

ЕМФ (единицы
мутности 
по формазину)

5 

Водородный 
показатель 

pH 

              II. Солевой и газовый состав 

6 

Щелочность 

мг-экв./л 

7 

Жесткость 

мг-экв./л 

8 

Кальций (Ca) 

мг/л 

9 

Магний (Mg) 

-"-

10 

Бикарбонаты (HCO3) 

-"-

11 

Фторид-ион (F) 

-"-

12 

Сульфаты (SO4 ) 

-"-

13 

Нитраты (по NO3) 

14 

Кислород (O2) 

-"-

15 

Углекислота 
свободная (CO2) 

-"-

16 

Сероводород (H2S) 

-"-

          III. Показатели органического загрязнения 

17 

Окисляемость 
перманганатная 

мг O2/л 

18 

Нитриты (по NO2) 

мг/л 

19 

Аммиак и 
аммоний-ион (NH4) 

-"-

20 

Общий углерод 

-"-

21 

Органический 
углерод 

-"-

22 

Неорганический 
углерод 

-"-

23 

Фенолы летучие, 
суммарно 

мкг/л 

24 

Хлороформ <*> 

-"-

25 

Бромоформ <*> 

-"-

26 

Четыреххлористый 
углерод <*> 

-"-

27 

Формальдегид <**> 

-"-

28 

Ди(2-этилгексил)фталат 

-"-

29 

Продукты миграции 
токсичных веществ из 
тары в зависимости 
от материала тары 

мг/л 

В соответствии
с таб. 1.4 

          IV. Металлы 

30 

Алюминий (Al) 

мг/л 

31 

Железо (Fe, суммарно) 

-"-

32 

Серебро (Ag) 

-"-

33 

Цинк (Zn) 

-"-

             V. Галогены 

34 

Бромид-ион мг/л 

35 

Хлор остаточный 
связанный <*> 

-"-

36 

Йодид-ион 

-"-

          VI. Неметаллические элементы 

37 

Бор (B) 

мг/л 

              VII. Микробиологические показатели 

38 

ОМЧ при 22 °C 37 °C 

КОЕ/мл 

39 

Общие колиформные 
бактерии 

КОЕ/100 мл 

40 

Термотолерантные 
колиформные бактерии 

КОЕ/100 мл 

41 

Глюкозоположительные 
колиформные бактерии 

КОЕ/100 мл 

42 

Споры 
сульфитредуцирующих 
клостридий <***> 

КОЕ/100 мл 

43 

Pseudomonas aeruginosa 

Обнаружение
в 1000 мл 

44 

Колифаги 

БОЕ/1000 мл

 \r\n
\r\n    <*> Анализ выполняется только в расфасованной воде, источником\r\nкоторой   является   питьевая   вода  из  централизованных  систем\r\nпитьевого водоснабжения.\r\n    <**> Анализ  выполняется  только  после  изменения  технологии\r\nводоподготовки.\r\n    <***> Анализ   выполняется   только   в   расфасованной  воде,\r\nисточником  которой  служит  вода   поверхностных   водоемов   или\r\nцентрализованных  систем  питьевого водоснабжения с водозабором из\r\nповерхностных источников.\r\n \r\n    Примечания. 1.  В  случае  невозможности  выполнения   полного\r\nанализа  на  базе  испытательного центра исследования по отдельным\r\nразделам  выполняются  в  других  аккредитованных  на  данный  вид\r\nисследований  лабораториях  (центрах).  При  этом  форма протокола\r\nаналогична представленной.\r\n    2. В   случае   отсутствия  результатов  углубленного  анализа\r\nисходной ("сырьевой")  воды  исследование  расфасованной  питьевой\r\nводы  при  t 20 - 22 °C проводится в полном объеме по показателям,\r\nпредставленным в таблице Приложения 4.\r\n \r\nФ.И.О., должность специалистов, проводивших исследования:\r\n \r\nДата выполнения анализа "__" _________ ____ г.\r\n \r\n                            Заключение\r\n \r\nРуководитель испытательной\r\nлаборатории                    (Ф.И.О.)\r\n \r\n \r\n 

Приложение 4

Приложение 5
(обязательное)

<*> Рассчитываются по формуле:

где:

Q1 - содержание в воде конкретного в-ва в мг (мкг)/л;

ПДК - предельно допустимая концентрация этого вещества в воде в мг (мкг)/л.

Рекомендуемая величина SUM <= 1.

Приложение 6

Приложение 7
(обязательное)

Оборудование, расходные материалы, питательные среды, метод посева и учет результатов - в соответствии с МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

При определении показателя ОМЧ при 37 °C делают посев по 1 мл в две чашки Петри. При необходимости определения двух показателей ОМЧ при 37 °C и при 22 °C посев по 1 мл производят в четыре чашки Петри (по две чашки Петри на каждую температуру). Посевы производят при горящей спиртовке.

Приоткрыв крышку чашки Петри, посев заливают небольшим количеством (8 - 10 мл) питательного агара, охлажденного до температуры 45 - 46 °C. Заливку питательного агара производят после фламбирования краев емкости. Посев немедленно смешивают с питательным агаром плавными вращательными движениями, избегая попадания на края и крышку чашки Петри, и оставляют на ровной горизонтальной поверхности. Время между внесением пробы и агара не должно превышать 10 - 15 минут.

После полного застывания чашки переворачивают крышкой вниз и две инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) часа, и две - инкубируют при температуре (22 +/- 1) °C в течение (68 +/- 4) часа.

При учете результатов подсчитывают все колонии на двух параллельных чашках, видимые при увеличении в два раза, и вычисляют среднее арифметическое. Результат выражают числом колоний в 1 мл пробы воды и выдают ответ - число КОЕ ОМЧ в 1 мл при 37 °C и при 22 °C.

Приложение 8
(обязательное)

Обнаружение ОКБ в расфасованной воде выполняют методом мембранной фильтрации или титрационным по МУК 4.2.1018-01.

При необходимости получения быстрого ответа о качестве воды, при производственном контроле определение ОКБ и ГКБ проводят ускоренным методом.

Принцип метода заключается в использовании на этапе идентификации комбинации двух признаков ОКБ: первый (основной) - характер роста колоний на лактозной среде Эндо - темно-красные с отпечатком на обратной стороне фильтра, что подтверждает способность ферментировать лактозу до кислоты; второй - отрицательный оксидазный тест или способность к газообразованию. Поскольку лактозоположительные бактерии, ферментирующие лактозу до кислоты и газа, аналогично ферментируют глюкозу, то газообразование можно подтвердить на средах с любым углеводом, однако использование подтверждающих сред с глюкозой целесообразнее, т.к. сокращает время анализа на сутки.

Выполнение анализа

Подготовка посуды, питательных сред и реактивов, техника мембранной фильтрации выполняется по МУК 4.2.1018-01.

Объем пробы воды 300 мл профильтровывают через мембранные фильтры, помещают на среду Эндо. Чашки с посевами ставят в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 +/- 2 часа.

Если после инкубации на фильтрах нет роста или выросли колонии, не характерные для колиформных бактерий - плесневые, морщинистые, пленчатые, губчатые, расплывчатые, прозрачные, - выдают отрицательный ответ.

Если на фильтрах обнаружен рост типичных для лактозоположительных бактерий колоний (выявляются благодаря дифференциальным свойствам лактозной среды Эндо) - темно-красных, красных с металлическим блеском или без него, слизистых розовых с отпечатком на обратной стороне фильтра - следует подтвердить их принадлежность к ОКБ. Для этой цели можно использовать один из вариантов.

Первый вариант

Выполняют оксидазный тест любым из методов (наложением мембранных фильтров на диск фильтровальной бумаги, смоченной реактивом, нанесением штрихом культуры на полоску фильтровальной бумаги, смоченной реактивом, накапыванием реактива на колонию и другими). При изменении цвета всех колоний (оксидазоположительные) дают отрицательный ответ.

Не изменившие цвета после контакта с реактивом типичные колонии подсчитывают и относят к группе ОКБ.

Второй вариант

Подсчитывают число типичных колоний каждого типа и подтверждают их способность образовывать кислоту и газ путем посева на полужидкую среду с глюкозой. Исследуют не менее 2 - 3 колоний каждого типа. Посевы инкубируют при температуре 37 °C. Просмотр реакции проводят через 4 - 6 часов и при наличии кислоты и газа дают положительный ответ. Пробирки, где образовалась только кислота или среда не изменилась, оставляют для окончательного учета через 24 часа.

К группе ОКБ относят бактерии, образующие типичные колонии на среде Эндо и кислоту и газ при ферментации глюкозы.

Допускается использование любых тест-систем для установления способности газообразования при ферментации углевода, имеющие сертификат качества.

Примечание. При производственном контроле наличие ОКБ служит основанием к приостановке выдачи сертификата качества на данную партию продукции. Дальнейшую идентификацию выросших розовых колоний можно не продолжать.

В индикаторную группу ГКБ входят помимо ОКБ еще и лактозоотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae, оксидазоотрицательные, растущие на среде Эндо в виде разного типа розовых колоний, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре (37 +/- 1) °C.

Принцип метода определения ГКБ заключается в подтверждении наличия бактерий, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа в том же посеве, что и для определения ОКБ. При обнаружении типичных и розовых (или только розовых) колоний подсчитывают ОКБ, а затем продолжают идентификацию розовых колоний по оксидазному тесту и способности образования кислоты и газа на подтверждающих средах с глюкозой.

Выполнение анализа

Если на фильтрах помимо типичных выросли колонии, характерные для лактозоотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, - розовые, розовые с красным центром, бледно-розовые, белесые (или только лактозоотрицательные), выполняют оксидазный тест путем помещения мембранного фильтра на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный реактивом для оксидазного теста. При признаках проявления реакции, но не позднее чем 5 минут, фильтр переносят обратно на среду Эндо и учитывают результат после четкого проявления реакции.

Если все колонии изменили цвет (оксидазоположительные), дают отрицательный ответ.

При наличии колоний, не изменивших цвет (оксидазоотрицательных), подсчитывают число таких колоний каждого типа и производят пересев в полужидкие среды с глюкозой. Исследуют не менее 2 - 3 колоний каждого типа. Инкубируют посевы при 37 °C в течение 4 - 24 часов. В качестве ОКБ подсчитывают типичные колонии. В качестве ГКБ подсчитывают в сумме колонии как типичные, так и розовые, которые способны образовывать кислоту и газ при ферментации глюкозы.

При отсутствии роста на мембранных фильтрах или при отрицательном ответе в подтверждающих тестах в протоколе анализа указывают: ОКБ и ГКБ не обнаружены в 300 мл.

При росте на фильтрах типичных колоний лактозоположительных бактерий и подтверждении их принадлежности к группе ОКБ (либо с отрицательным оксидазным тестом, либо ферментирующих глюкозу до кислоты и газа) их число суммируют, сумму делят на три и в протоколе анализа указывают: число КОЕ ОКБ/100 мл; и число КОЕ ГКБ/100 мл. В данном случае результаты по ОКБ и ГКБ - одинаковые, поскольку ОКБ ферментируют как лактозу, так и глюкозу до кислоты и газа.

При росте на фильтрах помимо типичных еще и розовых колоний оксидазоотрицательных бактерий, а также только розовых подсчитывают число колоний, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа при температуре 37 °C, затем суммируют с числом ОКБ, делят на три. В протоколе анализа указывают результат: число КОЕ ГКБ/100 мл.

Обнаружение оксидазоположительных колоний служит показанием к проведению анализа на обнаружение Ps. aeruginosa.

Ускорение анализа достигают использованием на первом этапе анализа в качестве среды накопления глюкозопептонной среды. Этот прием позволяет в одном посеве определять ОКБ и ГКБ, что возможно благодаря способности ОКБ ферментировать как лактозу, так и глюкозу как основной биохимический признак семейства Enterobacteriaceae. Кроме того, накопление колиформных бактерий в среде с глюкозой происходит более интенсивно за счет быстрого разложения глюкозы по сравнению с лактозой, что сокращает время анализа на сутки.

Выполнение анализа

Глюкозопептонную среду готовят так же, как лактозопептонную, заменив углеводлактозу на глюкозу МУК 4.2.1018-01.

Исследуемый объем воды 300 мл засевают в три емкости с 10 мл концентрированной глюкозопептонной среды по 100 мл в каждую емкость. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1 ) °C в течение 24 часов.

Отсутствие изменения среды позволяет дать отрицательный ответ.

Из посевов в среду накопления, где отмечено помутнение и газообразование или только помутнение, производят высев на сектора среды Эндо с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 16 - 18 часов.

При обнаружении роста на секторах, характерных для колиформных бактерий колоний, выполняют оксидазный тест одним из способов (нанесением штрихом колонии каждого типа на полоску фильтровальной бумаги, смоченной реактивом; нанесением капли реактива на часть сектора).

Отрицательный ответ дают в следующих случаях:

- в среде накопления нет признаков роста;

- на секторах среды Эндо нет роста;

- на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных бактерий колонии (прозрачные, с неровными краями, расплывчатые);

- все колонии на секторе оказались оксидазоположительные.

В протоколе анализа сообщают: отсутствие ОКБ в 300 мл и отсутствие ГКБ в 300 мл.

При обнаружении на секторах роста типичных оксидазоотрицательных колоний - темно-красных, красных, с металлическим блеском или без него - дают ответ о наличии ОКБ и ГКБ в пробе воды. В протоколе анализа сообщают: обнаружение ОКБ в 300 мл, обнаружение ГКБ в 300 мл.

Если на секторах не выявлен рост типичных колоний, а обнаружены розовые оксидазоотрицательные колонии и при этом в среде накопления установлено газообразование - дают ответ о наличии ГКБ. В протоколе анализа сообщают: обнаружение ГКБ в 300 мл.

Данный анализ является качественным. При необходимости получения количественного результата производят посев в глюкозопептонную среду трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл и устанавливают в каждой емкости наличие ОКБ и ГКБ, как указано выше.

При определении ОКБ учитывают емкости, при высеве из которых на среде Эндо обнаружены типичные колонии.

При определении ГКБ учитывают в сумме емкости, где на секторах среды Эндо обнаружены типичные колонии ОКБ, а также розовые, при газообразовании в среде накопления выдают ответ: НВЧ КОЕ ОКБ в 100 мл или НВЧ КОЕ ГКБ в 100 мл.

Результаты определяют по таблице МУК 4.2.1018-01.

Примечания. В соответствии с СанПиН единицей измерения ОКБ ГКБ и ТКБ является 100 мл, а норматив по этим показателям - отсутствие колиформных бактерий в 300 мл.

Норматив - это научно обоснованная величина, указывающая (при его соблюдении) на вероятность обеспечения эпидемической безопасности водопользования в отношении кишечных инфекций.

Единица измерения 100 мл условно принята для выражения количественного результата в целях сопоставления данных на международном уровне, а также при исследовании воды различных объектов и при работе разными методами (мембранным или титрационным). При работе титрационным методом результат может быть высчитан только на 100 мл в соответствии с международными статистическими таблицами расчета НВЧ (наиболее вероятного числа) микроорганизмов.

Приложение 9

Среда Бонде

Ингредиенты растворяют при нагревании, стерилизуют при 1 атм. 20 мин. Перед посевом добавляют 5 мл 0,01%-ного водного раствора кристаллического фиолетового на 100 мл среды.

Среда "Блеск"

100 мл питательного агара, стерильного, приготовленного из сухого препарата по прописи на этикетке, расплавляют на водяной бане. После охлаждения до температуры (приблизительно) 50 °C добавляют 0,3 г L-аргинина, 8 мл 10% водного раствора трифенилтетразолий хлорида (ТТХ), 10 мл стерильного обезжиренного теплого молока, тщательно перемешивают и разливают в чашки нетонким слоем (не менее 25 мл).

Исследуют пробу воды объемом 1000 мл, разделенную в две емкости по 500 мл. В каждую емкость добавляют по 50 мл среды Бонде, тщательно перемешивают и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 48 часов.

Через 24 часа просматривают посевы. При наличии роста Pseudomonas aeruginosa происходит помутнение среды Бонде и на поверхности появляется тонкая прозрачная пленка, часто поднимающаяся по стенке емкости. В журнале отмечают помутнение среды и образование пленки.

Для подтверждения Pseudomonas aeruginosa делают посев на среду "Блеск". Емкость перед посевом не взбалтывать. Петлей забирают пленку и делают посев штрихом для получения изолированных колоний и по 3 - 4 бляшки из каждой емкости. Посев в виде бляшки: делают укол петлей до дна чашки и затем растирают небольшую площадку вокруг укола по поверхности среды. Допустимо делать посев нескольких проб на секторах одной чашки. Посевы со средой "Блеск" инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 часов.

Емкости со средой Бонде оставляют в термостате еще на 24 часа для окончательного учета.

Через 24 часа отмечают характер роста на среде "Блеск". При наличии в пробе Ps. aeruginosa на среде "Блеск" вырастают темно-красные колонии с золотистым блеском или золотистыми вкраплениями на "бляшках". Появление блеска можно наблюдать уже через 20 - 22 часа инкубации при температуре 37 °C, но максимального развития реакция достигает через 42 - 44 часа.

Если на среде "Блеск" не отмечено роста или выросли колонии темно-красные, темно-вишневые, но без характерного блеска, то из емкостей, где отмечено помутнение или помутнение с пленкой, высев следует повторить через 48 часов.

При отсутствии роста в среде Бонде через 24 часа пробу инкубируют до 48 часов и в случае помутнения и образования пленки подтверждают Ps. aeruginosa на среде "Блеск", как указано выше.

Подтвердить наличие Ps. aeruginosa также можно путем посева подозрительной изолированной колонии на косяк с питательным агаром, на котором через 24 часа инкубации при температуре 37 °C в случае положительной реакции появляется синий, сине-зеленый, зелено-желтый пигмент. Пигментация может усиливаться при последующем выдерживании косяка на свету при комнатной температуре.

Отрицательный ответ выдают:

- при отсутствии признаков роста в посевах пробы в среду Бонде;

- при отсутствии роста на среде "Блеск";

- при росте на среде "Блеск" не характерных для Ps. aeruginosa колоний без блеска.

Результат сообщают: Ps.aeruginosa не обнаружена в 1000 мл воды.

Положительный ответ выдают:

- при росте на среде "Блеск" темно-красных колоний с золотистым блеском;

- при образовании характерного пигмента на питательном агаре.

При четкой реакции на среде Бонде (муть и пленка) и среде "Блеск" наличие пигмента определять не обязательно.

Результаты вносят в протокол анализа: Ps. aeruginosa обнаружена в 1000 мл воды.

Приложение 10
(обязательно)

Метод заключается в предварительном размножении колифагов в среде обогащения в присутствии E. coli и последующем его выявлении в виде зон лизиса (просветления) на газоне E. coli на питательном агаре.

Подготовка посуды, питательных сред (питательный агар готовят по способу, указанному на этикетке), мембранных фильтров, ведение культуры E. coli, методика подтверждения фаговой природы лизиса выполняется на МУК 4.2.1018-01.

Накануне проведения анализа культуру E. coli засевают в две пробирки со скошенным агаром. Через 18 +/- 2 ч инкубации при температуре 37 +/- 1 °C производят смыв бактерий с косяков 5 мл стерильного физиологического раствора и по стандарту мутности готовят взвесь E. coli в концентрации 109 бактериальных клеток в мл.

В исследуемую воду объемом 1000 мл вносят 100 мл 10-кратного питательного бульона и 10 мл смыва E. coli. Для контроля культуры 0,1 мл смыва E. coli помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Подготовленную пробу воды и чашку Петри с контролем E. coli помещают в термостат и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 18 +/- 2 ч.

После инкубации, при отсутствии колифагов на контрольной чашке, в стерильную пробирку отливают 10 мл и эту пробу освобождают от бактериальной флоры одним из двух методов.

1. В 10 мл пробы добавляют 1 мл хлороформа, пробирку закрывают стерильной резиновой или силиконовой пробкой, энергично встряхивают в течение 3 - 5 минут для равномерного распределения хлороформа по объему пробы и оставляют на 15 минут при комнатной температуре для полного осаждения хлороформа. Для дальнейшего исследования отбирают 1 мл пробы, не касаясь хлороформа.

2. 10 мл пробы фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мм, подготовленный по п. 7.1 МУК 4.2.1018-01. Фильтрат в объеме 1 - 2 мл отбирают в стерильную пробирку, помещенную в колбу Бунзена или непосредственно в стерильную колбу Бунзена. Полученный фильтрат используют для дальнейшего исследования.

В предварительно расплавленный и остуженный до 45 °C питательный агар добавляют приготовленный смыв бактерий E. coli из расчета 1,0 мл смыва на 100 мл агара. В стерильную чашку Петри пипеткой переносят 1 мл пробы освобожденной от сопутствующей бактериальной флоры одним их двух предложенных методов. Сверху пробу заливают подготовленным агаром. В качестве контроля E. coli дополнительно заливают одну стерильную чашку Петри. Залитые чашки осторожно покачивают для равномерного распределения агара. После застывания агара чашки переворачивают и помещают в термостат на 18 +/- 2 ч при (37 +/- 1) °C.

Если исследуется несколько проб, то целесообразно использовать одну чашку Петри, которую необходимо залить агаром с E. coli. После застывания агара разделить его поверхность на сектора (не более 6), пронумеровать их согласно количеству исследованных проб. На каждый сектор нанести каплю микропипеткой или штрихом стерильной бактериологической петлей из исследуемой пробы воды, оставив один сектор в качестве контроля.

Просмотр чашек после инкубирования осуществляется в проходящем свете. Проба считается положительной при наличии полного лизиса газона E. coli, наличии отдельных зон лизиса или единичных бляшек на чашке с исследуемой пробой воды при отсутствии зон лизиса или отдельных бляшек на контрольной чашке или контрольном секторе.

В протоколе отмечается: колифаги обнаружены или не обнаружены в 1000 мл воды.

При наличии зон лизиса в контроле результат считается недействительным. Анализ следует повторить с новой культурой E. coli.

Приложение 11
(обязательное)

Очищенная вода не должна содержать ооцист криптоспоридий. Исследование проводят в соответствии с МУК 4.2.964-00 (п. 2.1). Далее полученный осадок распределяют равномерно на предметных стеклах (не менее 4) и высушивают на воздухе. На тщательно высушенный мазок наносят 2 - 3 капли смеси Никифорова (смесь равных частей серного эфира и 96° этилового спирта) на 8 - 12 минут. После чего предметные стекла ставят вертикально и тщательно высушивают.

После этого мазки быстро проводят над пламенем горелки и окрашивают карболовым фуксином (см. раздел 4.3) в течение не менее 20 минут. Мазки промывают дистиллированной водой, обесцвечивают (дифференцируют) 5 - 10%-ной серной кислотой в течение 10 - 20 секунд и снова промывают. Затем дополнительно окрашивают 0,2%-ным водным раствором метиленового синего или 5% малахитовой зелени в 10% этиловом спирте в течение 3 - 5 минут. Промывают дистиллированной водой, тщательно высушивают на воздухе и исследуют с масляной иммерсионной системой микроскопа с увеличением не менее 1000 x.

Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки ярко-красного (малинового, вишневого) цвета и имеют вид округлых образований диаметром 5 - 6 микрон с отчетливо видимой оболочкой и структурированным содержимым (можно наблюдать наличие 4 веретенообразных темноокрашенных спорозоитов) на синем или зеленом основном фоне.

Приложение 12
(рекомендуемое)

<*> Колиформы - общие и глюкозоположительные колиформные бактерии.

<**> Pseudomonas aeruginosa определяет лаборатория, находящаяся вне территории производства; при обнаружении ОМЧ свыше допустимых норм.

<***> Споры сульфитредуцирующих клостридий определяют при использовании воды поверхностного источника (автономного или централизованного) водоснабжения или из незащищенного и малозащищенного водоносного горизонта (подрусловые, грунтовые воды, фильтрационные).

Примечания. 1. На производствах, где обеззараживание проводят на заключительном этапе водоподготовки непосредственно перед розливом, пункты 4 и 5 совпадают.

2. Пункты 5, 10, 11 относятся к каждому виду готовой продукции.

3. Частота контроля, указанная в пунктах 5, 10, может быть сокращена для производств с выпуском не более 100 бутылок в смену.

По пунктам 10 и 11: отбор проб производится 1 раз в неделю (1 раз в месяц) из емкостей, отобранных на хранение, методом случайной выборки.

Приложение 13
(обязательное)

Для исследования берут 10 емкостей объемом 2,0 л и менее или 4 емкости объемом 5,0 л. Выборку емкостей осуществляет сотрудник лаборатории из каждой партии, используемой для розлива, 1 раз в неделю. Горлышко каждой бутыли должно быть закрыто стерильной фольгой.

Смывы с бутылок производят в лаборатории после обработки помещения бактерицидными лампами.

Смывы выполняет путем последовательного перелива 100 мл стерильного физиологического раствора (8,5%-ного хлористого натрия) из одной бутылки в другую после тщательного ополаскивания всей внутренней поверхности емкостей.

Из последней емкости делают посев по 1 мл смывной жидкости параллельно в 2 чашки Петри, заливают посевы 8 - 10 мл расплавленного и охлажденного до температуры 45 °C питательного агара по общепринятой методике. Посевы инкубируют при температуре 37 °C в течение 24 - 48 часов.

Оставшуюся жидкость профильтровывают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм, помещают на среду Эндо или засевают в глюкозопептонную среду накопления при работе титрационным методом. Посевы инкубируют при температуре 37 °C и определяют колиформные бактерии по методике Приложения 9.

Емкости могут считаться годными для розлива при отсутствии колиформных бактерий и обнаружении не более 2 КОЕ/мл ОМЧ.

Для исследования выбирают по 2 емкости с каждой автоматической моечной машины 2 раза в месяц. Емкости закрывают стерильной фольгой и переносят в лабораторию.

Для определения ОМЧ сливают остаточную промывную воду в стерильную посуду с соблюдением правил стерильности. Посев остаточной воды производится, как описано в методе 1 для сливной жидкости.

Для определения колиформ в одну из емкостей наливают 100 мл стерильного физиологического раствора, тщательно ополаскивают внутреннюю поверхность, переливают во вторую и после ополаскивания фильтруют через мембранный фильтр, как описано в методе 1.

При ручной мойке емкостей посев производят 2 раза в неделю.

Бактериологический контроль укупорочных изделий производят не реже 1 раза в месяц.

Изделия, предназначенные для укупорки одноразовых емкостей, отбирают стерильным пинцетом в количестве 10 штук в стерильную широкогорлую колбу, заливают 100 мл стерильного физиологического раствора и встряхивают в течение 5 мин. Определение ОМЧ производят, как описано в методе 1. Оставшуюся жидкость фильтруют для определения колиформ.

Изделия, предназначенные для возвратных емкостей, также отбирают стерильным пинцетом непосредственно перед укупоркой в количестве 4 штук. С помощью стерильного тампона, смоченного в 10 мл физиологического раствора, производят смыв с внутренних поверхностей последовательно всех 4 изделий, периодически смачивая тампон. Затем тампон тщательно встряхивают в течение 5 минут в этом же физиологическом растворе, отжимают вращательным движением, прижимая к стенкам пробирки, и удаляют. Производят посев на ОМЧ методом заливки, на колиформы - методом мембранной фильтрации, как это описано в методе 1.

Укупорочные изделия считаются пригодными при отсутствии колиформных бактерий и при обнаружении не более 2 КОЕ/мл ОМЧ.

Приложение 14
(обязательное)

Контроль качества ополаскивания возвратных емкостей, т.е. контроль на наличие остатка моющих средств, производят по изменению pH в воде, остающейся в емкостях после ополаскивания.

При использовании каустических (щелочных) препаратов контроль проводят индикатором - 0,5% фенолфталеином. Для этого остаточную воду из емкости сливают в чистую посуду и добавляют 1 - 2 капли фенолфталеинового индикатора. Окрашивание воды в розовый цвет указывает на наличие каустического моющего средства в емкостях, что требует повышения длительности и интенсивности ополаскивания.

При использовании для мытья емкостей моющих средств, не содержащих каустических соединений, качество промывки емкостей определяют по разнице pH в воде, используемой для ополаскивания, и в воде, оставшейся в емкости.

Если pH воды из вымытой емкости меньше, чем pH промывной воды, то это является доказательством присутствия моющего некаустического средства и основанием для требования проведения мероприятий по улучшению этого этапа производства расфасованной воды.