Последнее обновление: 15.06.2024
Законодательная база Российской Федерации
8 (800) 350-23-61
Бесплатная горячая линия юридической помощи
![](/img/728x90/10.png)
- Главная
- "САНИТАРНО - МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1018-01." (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 08.02.2001)
![](/img/mat/content-gerb-small.png)
8.3. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом
8.3.1. Определение понятия показателя
Определение понятия показателей ОКБ и ТКБ по п. 8.2.1.
8.3.2. Область применения
Титрационный метод может быть использован:
- при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом мембранной фильтрации;
- при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;
- в случае преобладания в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.
Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую питательную среду с последующим пересевом на дифференциальную плотную питательную среду с лактозой и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам.
8.3.4. Выполнение анализа
При исследовании питьевой воды качественным методом (текущий санэпиднадзор, производственный контроль) засевают 3 объема по 100 мл.
При исследованиях воды с целью количественного определения ОКБ и ТКБ при повторном анализе производят посев: 3 объемов по 100 мл, 3 объемов по 10 мл, 3 объемов по 1 мл.
Каждый объем исследуемой воды засевают в лактозо-пептонную среду, приготовленную по п. 5.5. Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации.
Посевы инкубируют при 37 +/- 1 °C в течение 48 ч. Не ранее 24 ч инкубации проводят предварительную оценку посевов. Из емкостей, где отмечено наличие роста (помутнение) и образование газа, производят высев бактериологической петлей на сектора среды Эндо (п. 5.4.1) для получения изолированных колоний.
Емкости без наличия роста и образования газа оставляют в термостате и окончательно просматривают через 48 ч. Посевы без признаков роста считают отрицательными, и дальнейшему исследованию они не подлежат. Из емкостей, где отмечено помутнение и образование газа или только помутнение, делают высев на сектора среды Эндо.
Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре 37 +/- 1 °C в течение 18 - 20 ч.
При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий: темно-красных или красных, с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде, дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном объеме пробы.
Наличие ОКБ требуется подтвердить:
- если в среде накопления отмечено только помутнение;
- если принадлежность к лактозоположительным колониям вызывает сомнение у исследователя.
В этих случаях:
- проверяют наличие отпечатка на среде Эндо после снятия петлей подозрительной колонии;
- выполняют оксидазный тест по п. 8.2.3.2;
- подтверждают принадлежность к Граму по п. 8.2.3.3;
- подтверждают способность к газообразованию при посеве изолированных 1 - 2 колоний каждого типа с каждого сектора на среду с лактозой по п. 5.6 с последующей инкубацией посевов при температуре 37 +/- 1 °C в течение 24 - 48 ч.
При отсутствии изолированных колоний проводят рассев на среду Эндо общепринятыми бактериологическими методами.
Отрицательный ответ дают, если:
- в среде накопления нет признаков роста;
- на секторах среды Эндо нет роста;
- на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных бактерий колонии (прозрачные с неровными краями, расплывчатые и т.п.);
- все колонии оказались оксидазоположительными;
- все колонии оказались грамположительными;
- если в подтверждающем тесте на среде с углеводом не отмечено газообразования.
Для определения термотолерантных колиформных бактерий работают с секторами среды Эндо, где выросли типичные лактозоположительные колонии. Делают посев 2 - 3 изолированных колоний каждого типа с каждого сектора в пробирки с любой из лактозных сред, приготовленных по п. 5.6.
Среду перед посевом нагревают на водяной бане или в термостате до 44 °C. Немедленно после посева пробирки помещают в термостат и инкубируют при температуре 44 +/- 0,5 °C в течение 24 ч. Допускается просмотр посевов через 4 - 6 ч.
При образовании газа в среде накопления, росте на среде Эндо лактозоположительных бактерий и выявлении способности этих бактерий ферментировать лактозу до кислоты и газа в течение 24 ч при температуре 44 °C дают положительный ответ на наличие в этом объеме пробы воды ТКБ. Во всех остальных случаях дают отрицательный ответ.
Допустимо для ускорения выдачи ответа на присутствие ТКБ производить высев 1 мл из объемов среды накопления, где отмечено помутнение и газообразование, в пробирке с лактозо-пептонной средой с поплавком по п. 5.6 и прогретой предварительно до температуры 44 °С. Посевы выдерживают в термостате при температуре 44 +/- 0,5 °C в течение 24 ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.
8.3.5. Учет результатов
При исследовании 3 объемов по 100 мл результаты оцениваются качественно, и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из 3 объемов делается запись в протоколе "обнаружены в 100 мл".
При исследовании количественным методом определяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по табл. 1.1 Приложения 1.
Результат сообщают без доверительного интервала.
При отрицательном ответе на наличие ОКБ и ТКБ во всех исследованных объемах выдают заключение в протоколе "не обнаружены в 100 мл".
- Главная
- "САНИТАРНО - МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1018-01." (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 08.02.2001)