Законодательная база Российской Федерации

"МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ. ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ. ГОСТ ИСО 7218-2011" (утв. Приказом Ростехрегулирования от 13.12.2011 N 1477-ст)

Методы посева, предназначенные для получения только поверхностных колоний на агаровых чашках, имеют некоторые преимущества по сравнению с методом разливки в чашки для выращивания микроорганизмов внутри агара.

Микроорганизмы не подвергаются действию высокой температуры расплавленной агаровой среды, поэтому количество колоний может быть выше, а подсчет - более точным.

Используют предварительно заполненные агаровой средой чашки, толщина агарового слоя которых составляет не менее 3 мм. Слой агара должен быть ровным и не содержать пузырьков воздуха и поверхностной влаги.

Чтобы облегчить равномерное распределение, поверхность затвердевшего агара необходимо подсушить в соответствии с ISO/TS 11133 или, как определено другим соответствующим международным стандартом. В таком случае посевной материал абсорбируется в течение 15 мин.

С помощью стерильной пипетки пробы жидкого образца (обычно от 0,1 до 0,5 см3) для испытания или исходной суспензии в случае других образцов переносят на агаровую среду в чашки Петри (диаметром 90 или 140 мм соответственно). Этот шаг повторяют для следующего десятичного разведения (колонии, подлежащие подсчету, тогда будут представлены в степени разбавления 10^(-1) в случае материала жидкой пробы и 10^(-2) - в случае материала другой пробы) и. при необходимости, повторяют дальнейшие десятичные разведения.

Если необходимо подсчитать незначительное количество микроорганизмов в случае определенных продуктов, предел обнаружения можно увеличить в десять раз посредством анализа 1.0 см3 пробы в случае жидких продуктов и 1,0 см3 исходной суспензии - в случае других продуктов. Для этой цели. 1,0 см3 посевного материала распределяют или по поверхности большой чашки Петри (диаметром 140 мм), или по поверхностям трех обычных чашек Петри (диаметром 90 мм).

С помощью шпателя, изготовленного из стекла, пластмассы или стали (например, изготовленной из стекла палочки, изогнутой в форме хоккейной клюшки диаметром приблизительно 3,5 мм и длиной 20 см, изгибы выполнены под прямым углом на расстоянии 3 см от одного конца палочки и сплющены на концах с помощью нагревания) распределяют посевной материал по возможности быстро и равномерно по поверхности агара, не касаясь боковых стенок чашки Петри. Закрыв чашку крышкой, дают посевному материалу абсорбироваться в течение 15 мин при комнатной температуре.

В определенных случаях (как указано в соответствующем международном стандарте) посевной материал можно поместить на мембрану и потом распределить по среде, как описано выше.

Метод спирального нанесения посевного материала для определения уровня содержания микро-организмов проверен в межлабораторных испытаниях молока и молочных продуктов и других пищевых продуктов.

Используемое оборудование - спиральный дозатор - описан в 5.24.

Для приготовления чашек с агаровой средой рекомендуется использовать автоматический дозатор со стерильной системой дозирования, чтобы получить чашки с одинаковым объемом агаровой среды.

Во все чашки наливают одинаковое количество агара таким образом, чтобы под дозирующей иглой спирального дозатора высота слоя агара была одинаковой во всех чашках и чтобы угол контакта оставался правильным и одинаковым.

Альтернативно можно использовать готовые агаровые чашки, имеющиеся в продаже.

Обеззараживают кончик дозирующей иглы и трубку, обмакнув их в раствор гипохлорита натрия (см. 5.24.4), а затем в стерильную воду через систему, перед тем как втянуть в дозирующую иглу жидкий образец.

Помещают предварительно разлитую агаровую среду в чашке Петри на поворачивающий столик и опускают дозирующую иглу. Проба распределяется по среде по мере движения кончика иглы по поверхности агаровой среды. Засеянную чашку убирают, а дозирующую иглу возвращают в исходное положение. Иглу обеззараживают и загружают для посева в другие чашки.

После термостатирования на поверхность засеянной агаровой среды помещают специальную сетку для подсчета количества микроорганизмов в чашках, засеянных по спирали. Для определения количества микроорганизмов используют "правило двадцати". Подсчет колоний начинают, выбрав клин и начав подсчет от наружного края первого сегмента по направлению к центру, пока не подсчитают 20 колоний. Процедуру завершают подсчетом в сегменте, содержащем двадцатую колонию. На противоположной стороне чашки подсчитывают соответствующий участок и делят число колоний, подсчитанных по обе стороны, на объем образца, нанесенный на два данных участка. Объемы образца, соответствующие каждой части счетной сетки, приведены в инструкциях, которые прилагаются к каждому спиральному дозатору.