Законодательная база Российской Федерации

"БЕЗОПАСНОСТЬ РАБОТЫ С МИКРООРГАНИЗМАМИ I-II ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ. САНИТАРНЫЕ ПРАВИЛА И НОРМЫ. СП 1.2.011-94" (утв. Постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 04.05.94 N 011)

Приложение 5.1.
(Обязательное)

Бактерии

Риккетсии

Эрлихии (подсемейство Ehriichiae, сем. Rickettsiaceae)

Грибы

Простейшие

Вирусы
(В связи с отсутствием биноминальной номенклатуры для вирусов обозначения даются в русской транскрипции)

Хламидии

Яды биологического происхождения

Примечание:

1. Аттенуированные штаммы возбудителей I-II групп относят к микроорганизмам III группы патогенности. Аттенуированные штаммы III-IV групп относят к IV группе патогенности.

2. В качестве источника заболеваний человека и животных, вызываемых микроорганизмами I-IV групп, следует считать инфицированных: человека, теплокровных животных, переносчиков, объектов внешней среды.

Приложение 5.2.
(Обязательное)

1. Комиссия по контролю за соблюдением требований биологической безопасности в учреждении (Далее "Комиссия") является исполнительно-консультативным органом, контролирующим порядок проведения работы с биологическим материалом в диагностических, научно-исследовательских и производственных лабораториях.

2. Комиссия создается в учреждениях (предприятиях), на базе которых проводятся любые виды работы (диагностические, исследовательские, производственные) с биологическим материалом I-II групп патогенности.

3. Комиссия в составе не менее 3-5 человек, компетентных в вопросах безопасности работы с биологическим материалом, назначается приказом по учреждению сроком на 5 лет.

Председателем комиссии назначается заместитель руководителя учреждения по эпидвопросам (науке) или специалист, имеющий соответствующие знания и опыт работы.

4. В своей деятельности комиссия руководствуется настоящими Санитарными правилами, другими нормативными документами по обеспечению биологической безопасности и указаниями руководителя учреждения.

5. Комиссия по административной линии подчиняется руководителю учреждения, ответственному за состояние безопасности работы с биологическим материалом.

6. В целях обеспечения безопасности работы с биологическим материалом при проведении диагностических, исследовательских и производственных работ комиссия решает следующие задачи:

- организация и проведение постоянного контроля за соблюдением регламентированного порядка обеспечения биологической безопасности в учреждении;

- организация и проведение комплекса мероприятий, направленных на предупреждение аварийных ситуаций и ликвидацию их последствий;

- контроль за подготовленностью персонала к работе с инфекционным материалом и организация наблюдения за состоянием здоровья;

- осуществление контроля за выполнением требований соответствующих нормативных документов, а также распоряжений руководителя учреждения и предложений комиссии учреждения;

- проведение анализа состояния биологической безопасности и разработка комплекса мер по ее совершенствованию;

- подготовка отчетной и другой документации по вопросам биологической безопасности;

7. В соответствии с возложенными на нее задачами комиссия проводит следующий комплекс мероприятий:

- осуществляет плановый и периодически внеплановый контроль за выполнением регламентированного порядка обеспечения биологической безопасности;

- осуществляет контроль за своевременной диспансеризацией персонала, контролирует регламентированный порядок иммуно-профилактики, ведет учет лиц с повышенной чувствительностью к антибиотикам и имеющих противопоказания к вакцинации;

- в случае "аварии" <*>(4) при работе с биологическим материалом разрабатывает и представляет руководителю учреждения план мероприятий по ликвидации ее последствий;

- проводит анализ установленных нарушений правил безопасности, предпосылок к этому, причин аварий и представляет руководителю учреждения план мероприятий по повышению эффективности системы биологической безопасности;

- оформляет необходимую документацию для получения (продления) разрешения на проведение работы с биологическим материалом;

- проводит проверку знаний по вопросам обеспечения биологической безопасности персонала, работающего с биологическим материалом;

- контролирует установленный порядок выезда сотрудников, выдает и принимает обсервационные удостоверения;

- готовит отчет о работе комиссии за год и представляет его в учреждения осуществляющие надзорные функции п.4.1. настоящих правил;

- имеет план работы, утвержденный руководителем учреждения, нормативные и другие документы, необходимость которых определяется ее задачами и функциями.

8. В целях эффективной реализации своих задач комиссия имеет следующие права:

- требовать от руководителей подразделений и отдельных лиц безусловного выполнения правил биологической безопасности, а также ходатайствовать перед руководителем учреждения об устранении имеющихся нарушений;

- проводить самостоятельно или с привлечением других квалифицированных специалистов плановые и внеплановые проверки соблюдения правил биологической безопасности в учреждении;

- ходатайствовать перед руководителем учреждения о приостановлении работы с биологическим материалом в случае невозможности выполнения правил биологической безопасности или их систематического нарушения, а также о приостановлении или лишении допуска к работе с биологическим материалом отдельных лиц;

- возбуждать мотивированное ходатайство перед учреждением, выдавшим разрешение, о приостановлении использования или запрещении внедрения в практику новых лабораторных методик, видов оборудования, дезинфектантов и т.п., не обеспечивающих необходимого уровня биологической безопасности;

- рассматривать документы и давать заключения;

- заслушивать на заседании комиссии руководителей подразделений, сотрудников учреждения;

- ходатайствовать перед руководителем учреждения о привлечении к административной ответственности лиц за нарушение установленных правил безопасности работы с биологическим материалом.

Приложение 5.3.
(Справочное)

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание активного хлора - АХ не менее 26%) 0,5%, 1%, 2%, 3% по препарату растворы

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25 %) сухое вещество 0,5%, 1%, 2% (по препарату) осветленные растворы 10% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы 20% (по препарату) хлорно-известковое молоко

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%) сухое вещество 0,5%, 1%, 2% (по препарату) осветленные растворы 10% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы

4. Нейтральный гипохлорит кальция НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б) сухое вещество 0,15% (по АХ) раствор 0,25%, 0,5%, 1% (по АХ) осветленные растворы 5% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы

5. Гипохлорит кальция технический - ГКТ (содержание АХ не менее 35%) сухое вещество 0,4% (по АХ) осветленный раствор 1,5% (по препарату) осветленный раствор 5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы

6. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%) сухое вещество 0,15%, 0,5 % (по АХ) раствор 0,25%, 1 % (по препарату) осветленные растворы 5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы

7. Двуосновная соль гипохлорита кальция-ДСГК (содержание АХ не менее 30%) сухое вещество 1% (по препарату) осветленный раствор 5% (по препарату) осветленный и неосветленный растворы

8. Гипохлорит натрия (содержание АХ не менее 14%) 1% (по АХ) раствор

9. Гипохлорит натрия, получаемый на установке ЭЛМА-1<*>(5) или ЭДР-01<*>(6) 0,125%, 0,25% (по АХ) растворы

10. Анолит, получаемый на установке СТЭЛ<*>(7), с содержанием 0,05% АХ

11. Анолит, получаемый на установке СТЭЛ-МТ-1<*>(8) , с содержанием 0,06%, 0,09% АХ

12. Анолит,получаемый на установке ЭХА-30<*>(9), с содержанием 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05% AX

13. Сульфохлорантин или сульфохлорантин М (содержащий АХ не менее 15%) 0,1%, 0,2% по препарату растворы

14. ДП-2 (содержание АХ не менее 35%) 0,1%, 0,2% (по препарату) растворы

15. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержащий не менее 5% надуксусной кислоты - НУК) 1%, 2% (по препарату) растворы

16. Пергидроль (содержание перекиси водорода 30%) 3% раствор перекиси водорода

17. Перекись водорода с моющим средством<*>(10) (3% раствор перекиси водорода с 0,5 % моющего средства)

18. Пероксогидрат фторида калия (ПФК-1) (содержание перекиси водорода не менее 35%) 3%, 6%, 7%, 9% (по препарату) растворы

19. Полисепт <*>(11) 1 % (по препарату) раствор

20. Амфолан <*>(12) 1%, 2%, 3% (по препарату) растворы

21. Лизол А (содержание фенолов 50%) 2%, 3%, 10% (по препарату) растворы

22. I-хлор-бета-нафтол 0,5%, 2% (по препарату) растворы

23. Отходы или полупродукты промышленности, содержащие: 3% крезола или 1% AX, или 2% щелочи, или 1% кислоты с ПАВ анионного типа в соотношении 1:1 или 0,5:1

24. Едкий натр 10% (по препарату) раствор

25. Формалин 10%, 20%, 40% (по формальдегиду) водные растворы

26. Аммиак 10% водный раствор (для нейтрализации формальдегида в соотношении 1:1)

27. Кипячение 2% содовый раствор

28. Обработка водяным насыщенным паром под давлением (автоклавирование)

29. Спирт 70°

30. Сжигание

31. Прокаливание

32. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный метод, пароформалиновый

33. Аэрозольный метод обеззараживания

34. Газовый метод (дезинфекция парами формальдегида)

35. Ультрафиолетовое облучение

1. Хлорамин Б или ХБ 1-4% активированные растворы, содержащие 0,25-1% AX

2. Хлорная известь или белильная термостойкая известь сухое вещество 20% осветленные растворы, содержащие не менее 5% AX 4% активированные осветленные растворы, содержащие не менее 1% AX

3. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция (ДТС ГК) или нейтральный гипохлорит кальция (НГК) сухое вещество 15% осветленные растворы, содержащие не менее 5% AX 2 % активированные осветленные растворы, содержащие не менее 1% AX

4. Двуосновная соль гипохлорита кальция (ДСГК) 4% активированные растворы, содержащие не менее 1,2% AX

5. Едкий натр 10% раствор (70°С)

6. Пергидроль, содержащий 30-35% перекиси водорода 6% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства ("Прогресс", "Новость", "Лотос", "Астра") 3% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства при температуре раствора 50° С

7. Дезоксон-1 или дезоксон-4 раствор, содержащий 1% надуксусной кислоты

8. Формалин 20%, 40% (по формальдегиду) водные растворы

9. Кипячение

10. Прокаливание

11. Сжигание

12. Сухой горячий воздух (180°С)

13. Обработка паром под давлением 2,0 кгс/см (132 +- 2°С)

14. Все емкости, в которых проводится обеззараживание, должны быть закрыты крышкой, включая банки из-под животных

15. Обработка в камерах: паровоздушный и пароформалиновый методы

16. Аэрозольный метод обеззараживания

1. Хлорамин (содержание АХ не менее 26%) 1%, 3% (по препарату) растворы 0,5%, 1,5% (по препарату) активированные растворы хлорамина

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%) сухое вещество 3%, 10% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы 20% (по препарату) хлорно-известковое молоко

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%) сухое вещество 3%, 10% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы

4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция - ДТСГК (содержание АХ не менее 47%) сухое вещество 1,5%, 5% (по препарату) растворы

5. Нейтральный гипохлорит кальция (содержание АХ не менее 52% и 24% для марок А и Б) сухое вещество 1,5%, 5% (по препарату) растворы

6. Гипохлорит кальция технический - ГКТ (содержание АХ не менее 35%) сухое вещество 1%, 1,5%, 5% (по препарату) растворы

7. Двуосновная соль гипохлорита кальция (содержание АХ не менее 30%) - ДСГК 1%, 1,5%, 5%, 7% (по препарату) осветленные и неосветленные растворы

8. Сульфохлорантин и сульфохлорантин М (содержание АХ 15,6%) 0,1%, 0,2% (по препарату) растворы

9. ДП-2 (содержание АХ 40%) 0,1%, 0,2%, 0,5% (по препарату) растворы

10. Анолит, получаемый в установке ЭХА-30 с содержанием АХ 0,04% и 0,05%

11. Анолит, получаемый в установке СТЭЛ-МТ-I с содержанием АХ 0,06% и 0,09%

12. Анолит, получаемый в установке СТЭЛ с содержанием АХ 0,05%

13. Пергидроль с содержанием АДВ 30-35% 6% (по АДВ) раствор перекиси водорода 6% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства

14. Пероксогидрат фторида калия - ПФК-I 4% (по препарату) раствор

15. Дезоксон-1 или дезоксон-4 с содержанием НУК 5% 0,1%, 0,5% (по НУК) растворы

16. Лизол А 5% и 8% растворы

17. Формалин 40% (по формальдегиду) водный раствор

18. Аммиак 10% (по АДВ) водный раствор Для нейтрализации формальдегида применяется соотношение 1:1

19. Едкий натр 10% (по препарату) раствор

20. 70 раствор этилового спирта

21. Сода пищевая 2% раствор

22. Сода кальцинированная 2% раствор

23. Обеззараживание водяным насыщенным паром под избыточным давлением в паровом стерилизаторе (автоклаве)

24. Обеззараживание сухим жаром в воздушном стерилизаторе, 180°С, 60 мин.

25. Кипячение

26. Сжигание

27. Обработка в дезинфекционной камере: паровоздушный и пароформалиновый методы

28. Аэрозольный метод обеззараживания

29. Газовый метод (дезинфекций парами формальдегида)

30. Ультрафиолетовое облучение

Примечание:

в качестве активаторов хлорных препаратов могут быть использованы аммонийные соли (хлорит, сульфит или нитрат аммония) в соотношении с активным хлором 1:1 или 1:2, или аммиак в соотношении с активным хлором 1:8 ( хлора в 8 раз больше, чем аммиака)

1. Хлорная известь или белильная термостойкая известь сухое вещество 20% осветленные и неосветленные растворы, содержащие не менее 5% активного хлора 3% осветленные растворы, содержащие не менее 1% активного хлора

2. Хлорамин Б или ХБ 3% растворы, содержащие не менее 0,6% активного хлора 0,5% активированный раствор хлорамина

3. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция (ДТС ГК) или нейтральный гипохлорит кальция (НГК), гипохлорит кальция технический (ГКТ) сухое вещество 15% осветленный или неосветленный растворы, содержащие не менее 5% активного хлора 1,5% раствор, содержащий не менее 0,5% активного хлора

4. Пергидроль, содержащий около 30-35 % перекиси водорода 6% раствор перекиси водорода 3% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего вещества

5. Формалин - 20 % раствор формальдегида

6. Едкий натр 3% - 5% - 10% растворы

7. Лизод А 8% раствор

8. Кипячение

9. Сжигание

10. Сухой горячий воздух при 180° С

11. Обработка паром под давлением (автоклавирование)

11 Спирт 70°

12. Обработка в камерах а) паровоздушный метод б) пароформалиновый метод

1. Хлорамин Б или ХБ (содержащий активного хлора - АХ не менее 26%) 5% по препарату раствор

2. ДТСГК: 2% раствор двутретьосновной соли гипохлорита кальция

3. Сульфохлорантин или сульфохлорантин М (содержащий АХ не менее 15%) 3% раствор

4. Растворы бензилфенола 2-2,5%

5. Растворы лизола 5-10%

6. Растворы формалина 5-10%

7. Иодонат: 1% раствор

8. Кипячение

9. Обработка паром под давлением

1,1 кгс/см - 2 кгс/см (120 +2°С, 126 +- 2°С, 132 +- 2°С)

10. Сжигание

11. Прокаливание

12. Ультрафиолетовое облучение лампами

13. Аэрозольный метод обеззараживания

14. Обработка в камерах:

а) паровоздушный метод

б) пароформалиновый метод

Приложение 5.4
(обязательное)

А - с момента закипания;

R - для риккетсий;

К - для коксиел Бернета;

П - с последующим автоклавированием;

В - при попадании заразного материала экспозиции увеличивают до 4 мин;

Д - Двукратная обработка с интервалом 30 мин., продолжительность контакта 2 часа.

Приложение 5.5.
(Справочное)

Примечание:

1 - относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых должно проводиться с предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении;

2 - ГФ Х - Государственная фармакопея СССР, Х издание;

3 - "+" - температурный параметр, для контроля используется химическое соединение;

4 - используют любой из красителей, перечисленных в рецептуре 1;

5 - при использовании серы в качестве химического теста добавление красителя нецелесообразно, так как при плавлении вещества не происходит его смешение с красителем.

Химические тесты для контроля температурных параметров режимов работы воздушных стерилизаторов (1)

Примечание:

1 - В состав химических тестов, используемых для контроля работы воздушных стерилизаторов, краситель не добавляют, т.к. указанные химические соединения изменяют свой цвет при достижении температуры плавления;

2 - Относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых проводится с предосторожностью, хранение в закрытых шкафах в сухом помещении;

3 - ГФ Х - Государственная Фармакопея СССР Х издание;

4 - "+" - температурный режим, для контроля используют химическое соединение.

Химические индикаторы в паровом стерилизаторе размещают в каждой обеззараживаемой емкости и два - в самой камере, в воздушных стерилизаторах - от 5 до 15 в зависимости от емкости камеры.

Вместо химических тестов могут быть использованы термовременные индикаторы (ТВИ), контролирующие температуру и время стерилизации (ТВИ ИС-160 и ИС-180) при воздушной стерилизации, а при паровой стерилизации (ИС-120 и ИС-132) и наличия пара. Индикаторы представляют собой полоски длиной 2-3 см, отрываемые от бумажной ленты с нанесенным на нее индикаторным слоем, цвет которого необратимо меняется только при соблюдении режимов стерилизации, утвержденных ГОСТом 22649-83 и ОСТом 42-21-2-85.

Приложение 5.6.
(Обязательное)

1. Бактериологический контроль работы стерилизаторов проводят после монтажа и ремонта аппаратуры, а также в процессе его эксплуатации (плановый - 2 раза в год и при получении неудовлетворительных результатов контроля).

Контроль эффективности работы стерилизаторов осуществляют бактериологическим методом, используя биотесты на основании гибели спор тест-культуры. Биотесты представляют собой флаконы из трубки стеклянной для лекарственных средств ФИ/1-5 нс 1 ТУ 64-0709-10-88 (инсулиновые флаконы) или чашечки из алюминиевой фольги (диск размером 14 мм с луночкой-вдавление от неоточенного края карандаша), содержащие высушенные споры тест-культуры Вас. stearothermophilus ВКМ В-718, помещенные в пакеты из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85). Упаковочные тесты нумеруют и размещают в контрольные точки паровых стерилизаторов (5-10 тестов). По окончании стерилизации биотесты подвергают бактериологическому исследованию.

2. Штамм Вас. stearothermophilus ВКМ В-718 подвижная термофильная палочка, по Граму окрашивается положительно, культивируется при температуре 55 +- 1°С, исключающей развитие других широко распространенных микроорганизмов. Споры овальные, расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (рН 7,3 +- 0,1) через 24 часа образует помутнение среды, на мясо-пептонном агаре (рН 7,3 +- 0,1) - слабо выпуклые колонии диаметром 2-4 мм с ровным краем. Штамм непатогенен для человека и животных. Штамм получен из Всесоюзной коллекции микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов, хранится в музее культур НИИ профилактической токсикологии и дезинфекции (117246 г.Москва, Научный проезд, 18).

Приготовление биотеста

В ампулу с лиофилизированной культурой вносят 0,2 мл. стерильной водопроводной воды и оставляют в течение 30 минут при комнатной температуре.

Одну-две капли культуры засевают в 2 пробирки с бульоном (МПБ, Хоттингера, питательный сухой) с 0,5% глюкозы. Суточную культуру засевают на пробирки скошенного агара (Хоттингера, мясопептонный, сухой питательный). Для получения спор культуру, выращенную на твердой питательной среде, смывают 5 мл стерильной водопроводной воды и переносят во флаконы со скошенным картофельнопептонным агаром. Взвесь покачиванием флакона равномерно распределяют по поверхности среды, инкубируют при 55° в течение 10-12 суток в наклонном положении агаром вверх. Для создания достаточной влажности в термостат помещают открытые емкости с водой. На 7, 10 и 12 сутки культуру проверяют на интенсивность спорообразования. Достаточным количеством считают 80-90 % спор в поле зрения. Культуру смывают стерильной дистиллированной водой. В целях освобождения от вегетативных клеток суспензию прогревают на водяной бане при температуре 65-70° в течение 30 мин, центрифугируют трехкратно с частотой вращения 33, 33 с - 1 (2000 об/мин) по 15 минут, промывая осадок стерильной дистиллированной водой после каждого центрифугирования. Отмытые споры суспендируют в стерильной дистиллированой воде в соотношении 1 : 1 по объему. Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре 4°С в стерильных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками с резиновыми колпачками (срок хранения 2 года).

Чистоту культуры на всех этапах культивирования контролируют высевом на агаровые пластинки.

Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной суспензии

- 7

десятикратно разводят до 10 стерильной дистиллированной водой, высевая

-5 -7

на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл ориентировочно из 10 -10 ) (предел разведения зависит от титра полученных спор). Посевы инкубируют в течение 48 часов, проводят подсчет выросших колоний. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии определяют как среднее арифметическое число колоний с учетом разведения исходной суспензии и объема пробы для посева.

Пример расчетов. Предположим, что при посеве на три чашки Петри с

-5

агаром суспензия в разведении 1:100000 (10 ), подсчитано 140, 110 и 134

-6

колонии. Аналогичные высевы из разведений 10 привели к образованию

-7

12 ,14 и 16 колоний; из 10 - 5, 3 и 7 колоний. Вычисляем общее число колоний, а затем среднее количество колоний для каждого разведения 128, 14 и 5

Из расчета посевной дозы (0,1 мл на каждую чашку) вычисляем титр жизнеспособных спор в 1 мл исходной суспензии с учетом разведения, далее находим среднее арифметическое число колоний:

Таким образом, титр исходной суспензии составит:

Исходная суспензия должна содержать не менее

вносят из исходной суспензии с помощью дозатора пипеточного (ТУ 64-1-3329-81) в 0,02 мл в носители (стерильные инсулиновые флакончики с ватно-марлевой пробкой или чашечки из алюминиевой фольги, разложенные в чашки Петри), подсушивают в термостате при 37° или в эксикаторе над осушителем (силикагель, хлористый кальций) при комнатной температуре в течение 24 часов. Для определения фактической обсемененности исследуют не менее 3-х биотестов от каждой группы. Во флаконы (чашечки) вносят по 1,0 мл стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги, отмывают в широкогорлых пробирках с бусами в 10 мл) и встряхивают в течение 10 минут на аппарате для встряхивания жидкостей с последующим высевом на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл суспензии из трех последовательных десятикратных разведений.

3. Определение устойчивости спор тест-культур к действию водяного насыщенного пара под избыточным давлением проводят при температуре 120 +- 2°С.

Биотесты в упаковочной бумаге помещают в стерилизационной коробке в камеру парового стерилизатора. После набора давления в водопаровой камере

2

0,11+0,01 МПа (1,1+0,1 кгс/см ) проводят продувку парового стерилизатора (вытеснение воздуха паром из камеры парового стерилизатора) в течение 10 минут при открытом спускном кране и давлении в стерилизационной камере от

2

0,01 до 0,02 МПа (от 0,1 до 0,2 кгс/см ).

2

После продувки доводят давление пара в стерилизационной камере до 0,11 +- 0,01 МПа (1,1 +- 0,1 кгс/см ) температура 120+-2°С и через 5 минут (времени выживания спор тест-культуры) с момента установления давления спускают пар. Для уменьшения времени воздействия пара до и после экспозиции подъем давления проводят максимум в течение 8 минут, спуск - в течение 3 минут. Аналогичное исследование проводят в течение 15 минут времени выдержки (время гибели спор тест-культуры).

Контроль температуры осуществляют максимальным термометром. По окончании времени выдержки биотесты вынимают из стерилизатора и проводят бактериологическое исследование. Партию биотестов считают годными для использования, если показатели устойчивости спор тест-культуры соответствуют вышеописанным требованиям.

4. Для определения эффективности работы стерилизатора в обеззараженные биотесты и контрольный (без стерилизации) стерильно вносят по 5 мл питательной среды, инкубируют при 55 °С в течение 7 суток при ежедневном просмотре посевов, делая высевы на агаровые пластинки, из проросших емкостей.

При использовании полусинтетической среды с индикатором феноловым красным рост тест-культуры определяют по изменению красного цвета среды (рН 7,7 +- 0,1 на желто-оранжевый (рН 6,7 +- 0,1) за счет разложения глюкозы с образованием кислоты. В целях исключения ложного отрицательного результата (при наличии роста тест-культуры отсутствует изменение цвета питательной среды) флаконы (пробирки) должны быть плотно закрыты стерильными резиновыми пробками (N 7,5; 12,5). Отсутствие роста тест-культуры указывает на эффективность работы стерилизатора.

Рост других культур микроорганизмов относят за счет вторичного обсеменения. При наличии роста тест-штаммов проводится повторный контроль на удвоенном количестве биотестов. Если и при повторной проверке тест-культуры не инактивируются осуществляют тщательный контроль технического состояния аппарата и контрольно-измерительных приборов. При отсутствии роста тест-культур в контрольном биотесте (не подвергшемся стерилизации) устанавливается причина (нежизнеспособность тест-культуры, несоблюдение методики приготовления биотестов, питательных сред, условий культивирования).

5. Для спорообразования используют:

- картофельнопептонный агар (пептон - 5,0, мел - 1,0, агар - 25,0, картофельная вода - 1000 мл, рН 7,1 +- 0,1. Сырой картофель (200 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды) тщательно моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими ломтиками, заливают водопроводной водой и кипятят 30 мин. после закипания (молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и фильтруют в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр. Доводят объем фильтрата до первоначального. Устанавливают рН 7,1 +- 0,1 Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего добавляют мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120°С в течение 30 мин. После стерилизации среду во флаконах скашивают; - пшеничный агар (пшеничная крупа "Артек" или "Полтавская" - 500,0 , агар - 25,0 , дистиллированная вода - 1000 мл), рн 7,3 +- 0,1.

Пшеничную крупу "Артек" ("Полтавская") заливают дистиллированной водой. Через 12 часов настой аккуратно сливают, не выжимая, доводят до первоначального объема, добавляют агар и растапливают на водяной бане или в автоклаве (текучим паром 1 час). Остывший агар выкладывают на противень и срезают осадок. Агар растапливают на водяной бане, постоянно помешивая. Устанавливают рН 7,3 +- 0,1. Разливают во флаконы. Стерилизуют текучим паром по 1 часу в течение 3 суток. После стерилизации среду скашивают.

6. Для контроля используют бульон Хоттингера рН 7,3, агар Хоттингера РН 7,3, питательный бульон сухой рН 7,1 (Дагестанский НИИ питательных сред) , питательный агар сухой рН 7,3 (Дагестанский НИИ питательных сред), среда питательная для контроля стерильности сухая (предприятие Центрального НИИВС им.И.М.Мечникова) рН 7,0, бульон из перевара кровяных сгустков, полусинтетическая среда с индикатором феноловым красным РН 7,7 (аммоний фосфорно-кислый однозамещенный - NH40H2P04 - 1,0 г; магний серно-кислый MgSО - 0,2 г, калий хлористый - КС1 - 0,2 г, 4 глюкоза - 5.0 г, феноловый красный - 0,02 г, бульон Хоттингера с содержанием аминного азота - 140-160 мг % - 200 мл, дистиллированная вода - 800 мл, рН 7,7 +- 0,1. Компоненты смешивают и растворяют при нагревании на водяной бане, доводят рН до 7,7 +- 0,1, разливают во флаконы, стерилизуют при 110°С в течение 30 минут).

Приложение 5.7.
(Обязательное)

1. Замену фильтров тонкой очистки (Д-13, Д-15, Д-23 ФТО и др.) вытяжных систем вентиляции проводят согласно графику. При возрастании динамического сопротивления фильтра в 2 раза или при его повреждении проводится его внеплановая замена.

2. Перед снятием фильтра проводят предварительную дезинфекцию фильтра и магистрального воздуховода парами формалина либо аэрозольным способом.

3. Распыление дезинфектанта осуществляется через штуцер в воздуховоде при работающей вентиляции. По окончании распыления вентиляция выключается и по истечении времени экспозиции фильтр может быть снят.

4. Работу по демонтажу фильтра проводят в костюме IV типа с использованием резиновых перчаток (под рабочими рукавицами) и респиратора.

5. Снятый фильтр помещают в крафт-мешок или другую упаковку и переносят для автоклавирования или сжигания установленным порядком.

6. Перед установкой фильтр должен быть проверен на проскок (по масляному туману, с использованием биологического аэрозоля или другим способом). В процессе эксплуатации фильтр проверяется на проскок не реже 1 раза в квартал.

7. Работы по замене фильтра осуществляются техническим персоналом под наблюдением сотрудника подразделения, отвечающего за соблюдение требований биологической безопасности.

8. Для оценки защитной эффективности фильтров используют в качестве модели для создания аэрозоля культуры B.prodigiosum (ser. marcescens, chromobacterum prodigiosum) или E. Coli. Для создания аэрозоля используют специальные устройства - распылители. В целях минимального рассеивания бактериального аэрозоля в окружающую среду и направления факела аэрозоля в отверстие воздуховода перед фильтром применяют специальную насадку. Для определения счетной концентрации и фракционно-дисперсного состава биологического аэрозоля используют импактор микробиологический БП-50, разработанный научно-исследовательским институтом биологического приборостроения.

9. Отбор проб аэрозоля осуществляют двумя импакторами одновременно до прохождения фильтра (контроль) и после прохождения его (опыт). По результатам роста тест-штамма на агаровых пластинках до и после прохождения фильтра судят об его защитной эффективности. Используют

Для проведения опыта приборы монтируют в следующей последовательности (см. схему): насадку (4) устанавливают на отверстии воздуховода перед фильтром (2) с помощью болтов, шланги компрессора (9) надевают на конец форсунки распылителя (5). К входному и выходному отверстиям воздуховода после фильтра (2) присоединяют через шланги два микробиологических импактора БП-50(6), подключают к сети компрессор (7) и оба аспиратора (8) - (пылесос бытовой). Перед началом опыта проверяют работу компрессора и скорость движения воздуха через импактор. Опыт проводят при работающей вентиляции.

10. В колбу распылителя заливают приготовленную взвесь тест-штамма, после чего вставляют форсунку. Устанавливают распылитель на уровне отверстия воздуховода, включают компрессор и оба импактора. Соблюдаются следующие условия: скорость распыления по жидкости Ож = 1мл/мин, скорость распыления по воздуху V = 50 л/мин, время распыления - 10 минут, средний диаметр аэрозольных частиц dcp = 2,4 мкм (lgd = 0,389), максимальный диаметр частиц d max = 7 мкм при логарифмически нормальном распределении (среднее квадратичное отклонение lgd = 0,229); скорость отбора проб аэрозоля импактором БП-50 V = 50 л/мин, время отбора проб аэрозоля - 10 минут.

По истечении срока отключают сначала компрессор, а затем импакторы. Чашки Петри вынимают из импакторов и инкубируют при 37°С в течение 2-х суток. После проведения опыта установку дезинфицируют.

11. Учет результатов проводят через 24 и 48 часов. В популяции B.prodigiosum наряду с типично окрашенными колониями могут появляться различные по цвету варианты: розовые, слабо-розовые, с розовым центром.

Об эффективности задержания аэрозольных частиц исследуемым фильтром судят по отношению числа аэрозольных частиц, осевших до фильтра и после него. Эффективность фильтра выражают в процентах. При исправных фильтрах не должно быть роста колоний тест-культуры на чашках после фильтра, в то время, как до фильтра (для обеспечения достоверности испытаний) их должно быть не менее 200 колоний на чашках импактора БП-50.

Схема контроля фильтра при работающей вентиляционной системе

В связи с ограниченными возможностями редактора схема контроля фильтра не приводится

Рис.1

Обозначения:

1. Фильтр Д-13 (Д-15)

2. Воздуховод вентиляционной системы

3. Штуцер для отбора пробы

4. Насадка распылителя

5. Распылитель

6. Импактор ДП-50

7. Компрессор

8. Аспиратор отбора пробы

9. Соединительные шланги

Направление воздушного потока

Приложение 5.8.
(Обязательное)

1.1. Обеззараживание лабораторной посуды в передвижных дезинфекционных камерах производят только по эпидпоказаниям при массовом обследовании населения на холеру.

1.2. В передвижных дезинфекционных камерах обеззараживанием лабораторной посуды производят по паровоздушному методу.

1.3. Действующим агентом при этом методе является паровоздушная смесь (увлажненный горячий воздух) при температуре 97-98°.

1.4. Перед началом работы дезинфекционной камеры дезинфектор обязан проверить ее техническое состояние (обеззараживание лабораторной посуды в неисправной камере не допускается).

2.1. Перед загрузкой лабораторной посуды камеру освобождают от всех перевозимых в ней предметов, за исключением деревянных решеток, уложенных на полу. Не допускается работа в дезинфекционной камере, если отверстие для стока конденсата закрыто.

2.2. Перед загрузкой камеры первой партией лабораторной посуды ее прогревают до 80° и выдерживают при этой температуре в течение 15 мин. После прогрева и последующего проветривания через открытую дверь приступают к загрузке камеры лабораторной посудой.

Загрузку осуществляют со стороны, противоположной фронту управления дезинфекционной установкой (грязная зона).

2.3. Лабораторную посуду емкостью не более 1 л после использования помещают в баки или другую тару с крышками. Эти баки должны иметь мелкие отверстия по бокам на расстоянии 10 см от дна. Баки нумеруют и устанавливают в камере на двух уровнях: внизу на напольные деревянные решетки, не допуская соприкосновения друг с другом, и наверху - подвешивают на высоте 0,9-1 м от уровня пола при помощи 2-3 плечиков, входящих в комплект дезинфекционной установки, на каждый бак (тару) в зависимости от веса. Баки должны быть с открытыми крышками.

2.4. Загруженную камеру прогревают в течение 20 мин до 98°С. С этого момента производят отсчет экспозиции. Экспозиция дезинфекции 120 мин. В процессе экспозиции поступление пара в камеру должно быть постоянным. Такой режим обеспечивает обеззараживание лабораторной посуды с инфицированными питательными средами. Содержимое внутри баков равномерно прогревается. Показания термометра и экспозицию записывают в специальном журнале.

2.5. По окончании экспозиции открывают дверь со стороны пульта управления (чистая зона), проветривают камеру в течение 5 мин и затем выгружают баки с лабораторной посудой. При этом пользуются брезентовыми рукавицами для предохранения рук от ожогов.

3.1. Эффективность обеззараживания лабораторной посуды с отработанными питательными средами определяют двумя методами: термическим и бактериологическим.

3.2. Термический контроль осуществляют при каждой загрузке камеры максимальными термометрами путем закладывания их в середину каждого бака в специальных мешочках, которые нумеруют в соответствии с нумерацией баков.

3.3. По окончании обеззараживания посуды в камере мешочки извлекают из баков, записывают показания максимальных термометров в специальном журнале.

3.4. При равномерном распределении температуры в обеззараживаемых объектах, находящихся в камере, разница в показаниях термометров при паровоздушном методе допускается в 1-2°С.

3.5. Бактериологический контроль обеззараживания проводят периодически один раз в месяц с помощью посевов обеззараживаемой жидкости из емкостей максимального объема. Из флаконов после тщательного промешивания пипеткой отбирают 0,5 мл взвеси и засевают в пробирку с мясо-пептонным бульоном, а воду из колб фильтруют в объеме не менее 100 мл. Бактериологические посевы помещают в термостат при температуре 37°. Результаты посевов учитывают через 24-48 ч. При отсутствии роста культур лабораторную посуду считают обеззараженной.

Приложение 5.9.
(Обязательное)

1. Предприятия (учреждения) проводящие работу с микроорганизмами I-II групп патогенности должны проводить исследование сточных вод на наличие в них микроорганизмов, используемых в работе.

2. Отбор проб сточных вод необходимо проводить из всех колодцев канализационной системы предприятия (учреждения) перед ее выходом в общий коллектор.

3. Кратность отбора проб определяется руководителем предприятия (учреждения) в зависимости от вида возбудителя, характера и объемов проводимых работ, по согласованию с территориальными органами Госсанэпиднадзора.

4. При наличии на предприятии (учреждении) локальных очистных сооружений необходимо проводить определение остаточной концентрации активного вещества, применяемого дезинфекционного средства, в сточных водах, перед их выходом в общий коллектор

5. Отбор проб сточных вод и их лабораторное исследование проводят в соответствии с действующими нормативно-методическими документами, при соблюдении требований биологической безопасности.

6. На каждом предприятии (учреждении) должны быть разработаны "Методические рекомендации по исследованию сточных вод" с учетом местных условий и особенностей.

7. Результаты исследований фиксируют в специальном журнале, за подписью лиц, проводивших исследование.

В связи с ограниченными возможностями редактора схема планировки комнат и форма международного знака не приводятся

<*>(1)- далее - биологический материал I-II групп патогенности

<*>(2) - далее - Комиссия

<*>(3) КОЕ-число колоний-образующих единиц или число микробных клеток в 1 миллилитре

<*>(4) "Аварией" называют все случаи нарушения правил безопасности при работе с биологическим материалом, обуславливающие возможность заражении персонала, реальную или потенциальную опасность распространения инфекции

<*>(5)-Установки ЭЛМА-1 и ЭДР-01 выпускаются НИИ "Синтез" и МП "Аспо", г.Москва

<*>(6)-Установки ЭЛМА-1 и ЭДР-01 выпускаются НИИ "Синтез" и МП "Аспо", г.Москва

<*>(7) - Установки СТЭЛ и СТЭЛ-МТ-1 выпускаются НПО "Экран", г.Москва

<*>(8) - Установки СТЭЛ и СТЭЛ-МТ-1 выпускаются НПО "Экран", г.Москва

<*>(9) - Установка ЭХА-30 выпускается ПО "Медфизприбор", г.Казань

<*> (10)-Добавляется к растворам перекиси водорода для придания ей моющих свойств

<*>(11) - Полисепт - на основе поверхностно-активных веществ выпускается заводом биопрепаратов г.Покров, Владимирской области

<*>(12) - Амфолан - на основе поверхностно-активных веществ выпускается МП "Синтеко", г.Киев

<*>(13) При попадании заразного материала экспозицию увеличивают до 5 минут

<*>(14) Примечание: в случае аварии залить зараженную поверхность одним из указанных растворов