Последнее обновление: 28.05.2024
Законодательная база Российской Федерации
8 (800) 350-23-61
Бесплатная горячая линия юридической помощи
- Главная
- "ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.2218-07" (утв. Роспотребнадзором 31.05.2007)
6.5. Тесты межвидовой дифференциации патогенных для человека вибрионов
Определение галофильности вибрионов
Суточную агаровую культуру исследуемого штамма засевают в 1%-ю пептонную воду с 3% натрия хлорида. Через 3 - 4 ч инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) °С переносят строго по 1 капле выросшей культуры в пептонную воду без NaCl, с 7 и 10% натрия хлорида. Через 18 - 20 ч инкубации оценивают рост культур по помутнению среды.
К негалофильным относятся V. cholerae и V. mimicus, для роста которых достаточны следовые количества соли в среде. Вибрионы остальных видов, за исключением некоторых штаммов V. fluvialis и V. metshnikovii, не растут в 1%-й пептонной воде без добавления натрия хлорида и устойчивы к значительным его концентрациям.
Определение способности вибрионов к росту при разных температурах
Способность вибрионов к росту при температуре 4; 20; 30; 35; 40; 45 и 50 °С выявляют при посеве суточных культур в 1%-ю пептонную воду с 0,5% натрия хлорида для негалофильных вибрионов и с 1,5 - 2,0% натрия хлорида для галофильных вибрионов. Наличие роста оценивают визуально в сравнении с контролем. Наблюдают за посевами ежедневно в течение 2 недель.
Определение нитратредуктазы
а) Суточную агаровую культуру засевают в 1 мл бульона Хоттингера с 0,1% азотно-кислого калия. После 2-х суток инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) °С в посевы добавляют 0,5 мл реактива Грисса. В положительных случаях среда сразу же окрашивается в красный цвет.
б) К 1 - 2-суточной культуре в бульоне Хоттингера с 0,1% KNO3 добавляют 3 - 5 капель реактива, представляющего собой смесь равных объемов 0,1%-го раствора риванола в дистиллированной воде и 12%-го раствора соляной кислоты. В случае положительной реакции бульон окрашивается в красный цвет.
Определение бета-галактозидазы
Суточную агаровую культуру засевают на скошенную поверхность агара, содержащего 10% лактозы. Посевы инкубируют 1 - 2 суток при температуре (37 +/- 0,5) °С. Петлю выросшей культуры суспендируют в 0,25 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида, добавляют 0,25 мл водного раствора О-нитрофенил-b-D-галактопиранозита (ONPG) и помещают в термостат при (37 +/- 0,5) °С. Реакцию учитывают через 20 мин., 1, 3 и 24 ч. В положительном случае взвесь приобретает желтую окраску, отрицательном - остается бесцветной.
- Главная
- "ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.2218-07" (утв. Роспотребнадзором 31.05.2007)