Законодательная база Российской Федерации

"ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА И ПРОФИЛАКТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЮДЕЙ ЛЕПТОСПИРОЗАМИ. 3.1. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУ 3.1.1128-02" (утв. Главным государственным санитарным врачом 03.07.2002)

Лептоспиры плохо воспринимают окраску, поэтому все наблюдения проводят с живыми возбудителями в темном поле зрения микроскопа. С этой целью используют конденсор темного поля (например, ОИ-13) и осветитель ОИ-19 или другой системы.

Для выявления лептоспир методом микроскопии готовят препараты "раздавленная капля": небольшую каплю исследуемого материала наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло толщиной не более 1,0 - 1,1 мм и накрывают покровным стеклом толщиной 0,2 мм. На верхнюю линзу конденсора микроскопа помещают каплю дистиллированной воды.

Ввиду значительной величины микроба для исследования пользуются сухими системами: объектив - X40, окуляр - X10. Методом микроскопии исследуют цитратную кровь, мочу или ликвор больного, а также ткань паренхиматозных органов трупа.

Для приготовления цитратной крови смешивают 2 объема крови и один объем 1,5%-ного раствора лимоннокислого натрия; смесь отстаивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Микроскопируют надосадочную жидкость. Более эффективна подготовка материала способом двойного центрифугирования. На первом этапе проводят осаждение эритроцитов при 3000 об./мин. в течение 15 мин. На втором этапе полученную надосадочную жидкость центрифугируют 30 мин. при 10000 об./мин. Полученный осадок микроскопируют. Метод микроскопии цитратной крови - простой и доступный метод ранней диагностики лептоспироза. Однако следует помнить, что ввиду его

6 низкой чувствительности (10 клеток/мл) и кратковременности периода лептоспиремии (около 1 недели) отрицательные результаты микроскопии цитратной крови не дают основания для исключения диагноза лептоспироз. На фоне антибиотикотерапии диагностическая эффективность микроскопического метода резко снижается. Для подтверждения диагноза и определения серогруппы возбудителя кроме микроскопии необходимо проводить серологические и бактериологические исследования. Мочу (средняя порция) и ликвор исследуют в нативном состоянии или методом центрифугирования.

Микроскопия мочи используется также с целью прижизненного обследования животных (в т.ч. свиней, собак и др.) на лептоспироносительство.

Ткань паренхиматозных органов (печень, почки и др.) забирают пастеровской пипеткой и смешивают на предметном стекле с каплей физиологического раствора. Через 2 - 3 мин. частицы ткани удаляют, каплю накрывают покровным стеклом и тотчас микроскопируют. Взвесь не должна быть слишком густой. При исследовании почек взвесь готовят из коркового слоя органа, где локализуются лептоспиры.

Сходным образом готовят препараты для микроскопии из почек грызунов и других животных при их исследовании на лептоспироносительство.

При микроскопических исследованиях следует учитывать следующие возможные ошибки:

- наличие в препарате образований (псевдоспирохет), по морфологии отдаленно напоминающих лептоспир, - нитей фибрина, стромы эритроцитов и т.д. От лептоспир их отличает отсутствие концевых крючков и активной подвижности;

- наличие в препарате других извитых форм микроорганизмов, например спирилл, особенно часто обнаруживаемых при исследовании несвежего патологического материала;

- дефекты покровного стекла при неправильной настройке микроскопа могут быть ошибочно приняты за лептоспиры;

- плохое освещение препарата: при правильном освещении всегда видны пассивно или активно двигающиеся частицы.

Значительно реже для обнаружения лептоспир в органах и тканях используют окраску мазков-отпечатков по Романовскому-Гимза, импрегнацию серебром гистологических срезов по Вартину-Стерри. С этой же целью можно также использовать метод иммунофлуоресценции и полимеразную цепную реакцию.