Законодательная база Российской Федерации

"ГОСУДАРСТВЕННЫЕ ИСПЫТАНИЯ И РЕГИСТРАЦИЯ НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ. САНИТАРНЫЕ ПРАВИЛА. СП 3.3.2.561-96" (утв. Постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 31.10.96 N 33)

Отчет о результатах доклинических испытаний специфической активности, токсичности (специфической безопасности), аллергизирующего действия новых МИБП и их влияния на иммунную систему, направляется учреждениями-разработчиками нового препарата в Комитет МИБП при Минздраве России для решения вопроса об испытании реактогенности, безопасности и специфической активности лабораторных серий на ограниченной группе людей.

5.1. Определение специфической активности. Общие принципы

Для определения специфической активности препаратов должны использоваться информативные лабораторные методы, позволяющие получать данные, коррелирующие с результатами применения препаратов у людей.

Принципы оценки активности препаратов, предназначенных для активной иммунизации человека (вакцины, анатоксины), должны быть основаны на определении степени иммунологического ответа у экспериментальных животных, иммунизированных данными препаратами.

При изучении специфической активности новых препаратов и последующей разработке требований к ним необходимо основываться на определенных принципах, излагаемых ниже.

5.1.1. При выборе вида лабораторных животных и методов их заражения необходимо стремиться к тому, чтобы степень восприимчивости животных к инфекционному агенту или токсину и патогенез инфекционного процесса были максимально близки к таковым у человека.

В процессе доклинического изучения целесообразно использовать несколько видов животных.

5.1.2. Испытания следует проводить на животных одной линии, отличающихся меньшими индивидуальными различиями в иммунореактивности и чувствительности к инфекционным агентам и токсинам.

5.1.3. Специфическую активность препаратов, предназначенных для активной иммунизации, следует оценивать по устойчивости вакцинированных животных к специфическому инфекционному агенту или токсину и по уровню специфических антител в крови. В случае, когда при формировании невосприимчивости клеточные механизмы играют определяющую или паритетную роль, следует изучить клеточный механизм специфического иммунного ответа.

Оценку специфической активности сывороточных препаратов следует проводить на животных путем определения их защитных свойств в отношении специфического инфекционного агента или токсина. При этом одновременно целесообразно использовать также доступные пробирочные методы и определять степень корреляции результатов, получаемых в этих опытах и опытах на животных.

5.1.4. Испытание иммуногенности препаратов следует, как правило, проводить при однократном введении. Исключение могут составлять препараты, однократное введение которых неэффективно.

5.1.5. Дозы антигенов для иммунизации животных должны избираться с таким расчетом, чтобы испытание напряженности иммунитета проводилось введением достаточно большой дозы инфекционного агента или токсина.

Необходимо избегать применения чрезмерно больших доз антигенов, приводящих к гипериммунизации и нивелированию показателей иммуногенности препаратов с разной активностью.

5.1.6. Испытание напряженности иммунитета следует проводить в период развития максимального его уровня.

5.1.7. Специфическую активность препаратов необходимо оценивать количественно в сравнении с применяемыми в практике.

Для получения количественной характеристики специфической активности препарата обязательным условием является проведение исследований на достаточно большом числе животных и статистическая обработка получаемых результатов.

Уровень иммунологического ответа следует выражать числом ЛД50 инфекционного или токсического материала, к которому устойчиво 50% животных, иммунизированных одной выбранной дозой антигена (метод "постоянной дозы антигена"). Во втором варианте животных иммунизируют несколькими дозами антигена и рассчитывают его дозу, защищающую 50% животных (ЕД50) от определенной дозы инфекционного агента или токсина.

При проведении испытаний следует использовать препараты сравнения. В качестве препаратов сравнения используют препараты (серии), наиболее полно охарактеризованные по показателю активности в многократно повторенных экспериментах. При разработке усовершенствованных препаратов в качестве препаратов сравнения должны быть использованы препараты-аналоги из числа применяемых в практике; при наличии утвержденных стандартных образцов активности использование последних при оценке активности модифицированных препаратов является обязательным.

5.1.8. При выборе препаратов сравнения следует учитывать наличие в них адъютантов. Одним из основных и принципиальных условий правомерности количественного сопоставления активности двух препаратов является параллелизм линий, выражающих зависимость между дозой введенного антигена и полученным иммунологическим эффектом ("линии регрессии").

В качестве препаратов сравнения необходимо применять лиофилизованные препараты, длительно сохраняющие свои свойства без изменений.

5.1.9. Специфическую активность живых вакцин следует также оценивать по содержанию живых бактерий или инфекционных единиц вируса. Количество живых бактерий или вирусных инфекционных единиц в живых вакцинах определяют с помощью общепринятых или специально разработанных и аттестованных методов с использованием соответствующих субстратов (питательные среды - для бактерийных вакцин, клеточные культуры - для вирусных вакцин).

5.1.10. Для вакцинных препаратов, не имеющих адекватных лабораторных моделей, характеристику специфической активности получают путем изменений в них с помощью иммунологических и биохимических методов специфических антигенов, с которыми связана иммуногенная активность.

5.1.11. С учетом сложности оценки специфической активности препаратов и трудности прогнозирования надежности и информативности (степень корреляции результатов с данными, получаемыми у людей) какого-либо одного метода, при экспериментальном доклиническом изучении новых препаратов следует для оценки специфической активности использовать несколько методов с последующим их включением в нормативную документацию.

5.1.12. При разработке оценочных методов должны быть четко регламентированы все элементы, влияющие на получаемые результаты (характеристика животных, условия и техника постановки опытов, методы статистической обработки с расчетом доверительных границ полученных показателей). Крайне важно метрологическое обеспечение технических операций, связанных с использованием различных средств измерения, включающих пипетки, мерную посуду, шприцы, измерительную аппаратуру, и использование стандартизированных реактивов и других материалов. Требования к метрологическому обеспечению должны быть регламентированы соответствующими нормативными документами.

5.2. Определение токсичности инактивированных бактериальных
и вирусных вакцин и анатоксинов

При доклиническом изучении токсичности и некоторых фармакологических свойств МИБП следует определять его побочное действие на органы и системы организма лабораторных животных.

Испытанию подлежат не менее трех лабораторных серий препарата с охарактеризованной в условиях эксперимента профилактической (терапевтической) эффективностью или антигенной активностью. Результаты испытаний представляют раздельно по каждой серии.

Изучение нового препарата должно быть проведено в сравнительных опытах с одной или несколькими сериями однонаправленного коммерческого препарата (при его наличии) или коммерческого препарата, близкого по природе, структуре, назначению (например, с инактивированной гриппозной вакциной при изучении новой инактивированной вирусной вакцины, со столбнячным анатоксином при изучении нового анатоксина и т.п.).

Сравнительное изучение осуществляют в условиях одного опыта на лабораторных животных из той же партии.

Заключение о возможности испытания препарата на людях должно основываться на сопоставлении соотношения эффективность-токсичность разрабатываемого препарата и препарата сравнения с учетом предполагаемой дозы нового препарата для человека и его назначения. В случае, если в состав препарата в качестве дополнительных компонентов (стабилизатора, сорбента, консерванта и т. п.) входят вещества, на введение которых человеку не имеется разрешения Фармакологического комитета и которые не применялись в производстве МИБП, должны быть представлены материалы, свидетельствующие о возможности их введения человеку.

5.2.1. Определение "острой" токсичности.

Токсичность в остром опыте при однократном введении определяют не менее чем на двух видах животных. Расчеты параметров летального эффекта (ЛД50) для мелких животных проводят по одному из общепринятых биометрических методов; при испытании токсичности на крупных животных допустимо так называемое приблизительное определение. При невозможности определить ЛД50 животным вводится максимальная доза испытуемого препарата.

Внутривенный способ введения препарата (жидкого, растворенного в жидкостях, которые можно вводить внутривенно) должен быть основным во всех опытах; в случае, если препарат содержит сорбент, его токсичность определяют до сорбции. Наряду с этим, токсичность препарата обязательно исследуют при том пути введения, который предполагают использовать в практике.

Ежедневной регистрации подлежат: гибель животных, их вес, а также наличие или отсутствие возможных клинических симптомов интоксикации.

Во всех экспериментах, предусматривающих выполнение патоморфологических исследований, используют равное количество контрольных интактных животных. Контрольную группу формируют из животных той же партии и исследуют в те же сроки, что и животных, получивших испытуемый препарат и препарат сравнения (приложение 1, п.1.1).

5.2.2. Определение "хронической" токсичности. Хроническую токсичность определяют для МИБП, вводимых повторно и в больших дозах.

Токсичность в хроническом опыте при многократных введениях определяется не менее чем на двух видах животных (см. п.5.2). Обязательным путем введения является способ, рекомендуемый для практического применения. При длительном испытании на мелких животных препаратов, предназначенных для внутривенных инъекций, допустимо внутрибрюшинное введение.

Наблюдение за животными проводят в течение периода введения препарата и последующих 7 сут. При этом ежедневно регистрируют массу животных, а также возможные клинические симптомы интоксикации. По окончании введения препарата органы животных подвергают гистологическому исследованию. Допускается проведение гистологического исследования органов одного вида животных, оказавшегося более чувствительным к токсическому действию препарата, и использование одной серии препарата, ЛД50 которой была наименьшей. Гистологическому исследованию подвергают также органы всех животных, павших в течение периода наблюдения (см. приложение 1, п.1.2).

5.2.3. Определение местного действия.

Данное исследование дополняет изучение токсичности в остром и хроническом опытах. Препарат вводят методом и в дозе (концентрации), предлагаемой для использования в практике.

В случае, если препарат предполагают применять внутрикожно, подкожно или внутримышечно, оценку местнораздражающего действия осуществляют после однократного введения. В остальных случаях (при внутривенном, пероральном, ингаляционном введении, введении в конъюнктивальный мешок) - после соответствующего числа аппликаций, которые предполагаются при его применении в практике. Количество животных в группе должно быть не менее 15.

Оценку местного действия осуществляют на основании данных осмотра, проводимого в течение срока введения препарата и последующих 7 сут., а также результатов гистологического исследования (см. п.5.2.4).

Гистологическому исследованию подлежат: ткани в месте введения и регионарные лимфатические узлы (при внутримышечном, подкожном, внутрикожном, накожном введении); стенка вены и подкожная клетчатка в месте введения (при внутривенном введении); слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта, мезентериальные лимфатические узлы (при энтеральном введении); слизистая оболочка дыхательных путей, легкие и паратрахеальные лимфатические узлы (при ингаляционном введении); ткани глаза (при введении в конъюнктивальный мешок).

5.2.4. Патоморфологические исследования.

Результаты макро- и микроскопического исследования органов животных, получивших новый препарат, препарат сравнения, а также контрольных животных, регистрируют в протоколах или заносят в регистрационную карту; документируют микрофотографиями. На основании полученных результатов оформляют заключение о токсических свойствах испытуемого препарата. Указанные материалы вместе с другими формами документации представляют в ГИСК им.Л.А.Тарасевича. Гистологические препараты и парафиновые блоки сохраняют до принятия Комитетом МИБП решения по результатам доклинического испытания препарата (см. приложение 1, п.4).

5.2.5. Определение влияния на гематологические показатели.

Исследование осуществляют на двух видах животных после однократного введения препарата в дозе, которую предполагается вводить человеку, или в максимальной дозе, которая при определении ЛД50 не вызвала гибели животных, а также после многократного введения.

Допускается проведение исследования с одной из серий, ЛД50 которой была наименьшей.

Полный клинический анализ крови проводят по общепринятой методике до, через 24 ч и 5-7 сут. после введения (окончания курса введения) препарата не менее чем у 10 животных, получивших испытуемый препарат и препарат сравнения, а также у соответствующего количества животных контрольной группы. Полученные результаты подвергают статистической обработке.

Если препарат предназначен для внутривенного введения, то одним из общепринятых методов должно быть изучено его влияние на свертываемость крови, а также показано отсутствие гемолитического действия.

5.2.6. Определение пирогенности.

Испытанию подлежат препараты, предназначенные для внутривенного, внутримышечного, подкожного введения и введения в полости. При проведении исследований рекомендуется определить максимальную дозу, не вызывающую пирогенного эффекта. Определение пирогенности проводят согласно методике, определенной соответствующим НТД. В случае, если препарат является сорбированным, в испытании следует использовать несорбированный полуфабрикат.

5.2.7. Определение влияния на детоксицирующую функцию печени.

Исследование проводится при оценке бактериальных вакцин с так называемой гексеналовой пробой, основанной на определении длительности гексеналового наркоза*(2).

Допускается проведение исследований одной серии, охарактеризованной по показателям острой и хронической токсичности.

Исследование может быть также осуществлено с использованием биохимических, гистологических и других методов, позволяющих выявлять указанные изменения.

В качестве препарата сравнения рекомендуется использовать коммерческую серию инактивированной брюшнотифозной вакцины - препарата, обладающего наибольшей реактогенностью для человека; животным контрольной группы вводят дистиллированную воду, отвечающую требованиям ГФ, в том же объеме, что и препарат. Статистически значимое удлинение продолжительности наркоза у животных, получивших испытуемый препарат (в сравнении с продолжительностью наркоза у контрольных животных), указывает на угнетение им детоксицирующей функции печени. В этом случае продолжительность наркоза у животных, получивших испытуемый препарат, не должна превышать таковую у животных, получивших брюшнотифозную вакцину (см. приложение 1, п.1.3).

5.2.8. Определение влияния на центральную нервную систему.

Исследование проводится при оценке бактериальных и вирусных вакцин.

Исследования проводят, используя одну из двух экспериментальных моделей: судорожную пробу с тиосемикарбазидом (ТСК) или коразолом. Использование указанных моделей позволяет выявить возможные воздействия испытуемого препарата на процессы как торможения, так и возбуждения, что будет проявляться в ускорении гибели иммунизированных животных после введения соответствующего препарата.

Достоверное ускорение гибели иммунизированных мышей в ответ на введение ТСК или коразола свидетельствует об отрицательном воздействии испытуемого препарата на функциональное состояние ЦНС.

Результаты изучения влияния препарата на детоксицируюшую функцию печени и центральную нервную систему учитывают при составлении программы испытания препарата на добровольцах.

5.3. Определение специфической безопасности живых вакцин.
Общие принципы

Доклиническое изучение специфической безопасности живых вакцин должно проводиться в основном на уровне вакцинного штамма при его аттестации.

Материалы исследований должны содержать данные о:

- молекулярных механизмах аттенуации (если они известны): генная мутация (точечная, множественная, определение нуклеотидной последовательности генома в сравнении с вирулентным штаммом с указанием области мутации), рекомбинация;

- генетической однородности популяции;

- генетической стабильности биологических характеристик штамма;

- остаточной вирулентности штамма для различных видов лабораторных животных при нескольких путях введения.

Эти показатели должны оставаться стабильными при многократном пассировании (5-10 пассажей) штамма на наиболее чувствительной лабораторной модели и в субстрате получения препарата. Для получения корректных результатов эксперимент следует проводить в максимально постоянных условиях.

5.3.1. Определение ин витро.

5.3.1.1. Аттенуированные штаммы вирусов.

Аттенуированные штаммы вирусов должны быть изучены по следующим генетическим маркерам:

- остаточная вирулентность, в т.ч. нейровирулентность у различных видов животных;

- репродуктивная активность в субстрате получения препарата при различных температурах - rct-признак;

- Т50-признак (термостабильность);

- И-признак (чувствительность к ингибиторам);

- S-признак - однородность по составу и морфологии бляшек под агаровым покрытием.

5.3.1.2. Вакцинные штаммы бактерий не должны обнаруживать признаков диссоциации при выращивании на жидких и твердых питательных средах, обладать типичной морфологией и характеризоваться типичными для вида ферментативными свойствами.

5.3.2. Определение остаточной вирулентности на лабораторных животных.

Исследования должны быть проведены на нескольких видах животных, обладающих наиболее высокой восприимчивостью к заражению вирулентными штаммами соответствующего микроба, при различных способах введения препарата. Обязательному испытанию подлежат: способ введения, аналогичный естественному пути заражения, и способ, которым препарат предлагается вводить человеку. Испытуемый препарат вводят в нескольких дозах: превышающей и равной человеческой, а при выявлении клинической картины заболевания и в меньших дозах. При испытании живых бактериальных препаратов может быть использована методика острой и хронической токсичности (см. раздел 5).

При наличии однонаправленной живой вакцины последняя должна быть использована в качестве препарата сравнения.

При необходимости в исследовании используют вирулентный штамм.

Срок наблюдения за инокулированными животными определяется клиническим течением инфекции, вызванной вирулентным штаммом, и должен превышать срок развития максимальных проявлений симптомов последней не менее чем на 15 сут. При наблюдении ежедневно регистрируют возможные клинические проявления инфекционного процесса, а также массу животных. При использовании крыс, морских свинок и крупных животных ежедневно в определенное время дня проводят измерение температуры. Отмечают также все изменения в месте введения препарата и в области регионарных лимфатических узлов. Обязательным является патоморфологическое исследование ЦНС и внутренних органов, а также проведение реакции иммунофлюоресценции с целью индикации антигена и его накопления в иммунной системе и в других чувствительных тканях в ближние и отдаленные сроки опыта.

Штаммы нейротропных вирусов должны быть дополнительно изучены при интрацеребральном введении на мелких лабораторных животных, а затем на обезьянах.

В экспериментах по интрацеребральному введению аттенуированного штамма целесообразно для сравнения использовать группу животных, зараженных вирулентным штаммом. В этих экспериментах также должно быть установлено, что вакцинный штамм не вызывает развития хронической инфекции.

5.3.3. Патоморфологические исследования при определении остаточной вирулентности.

5.3.3.1. Оценка нейровирулентных свойств вакцинных штаммов. Оценка нейровирулентных свойств вакцинных штаммов проводится в двух основных тестах.

5.3.3.1.1. При введении вируса непосредственно в ЦНС (в область таламуса с двух сторон, при необходимости - в поясничное утолщение спинного мозга) экспериментальных животных. Инокуляционное повреждение должно ограничиваться зоной подкорковых ганглиев и таламической областью и не затрагивать желудочковую систему.

В этом тесте определяют:

- специфическую активность штамма (способность вызывать комплекс характерных структурных изменений в элективных зонах ЦНС);

- уровень аттенуации штамма в сравнении с его вирулентным аналогом (учитывается выраженность клинических проявлений, при микроскопическом исследовании - распространенность процесса вне области инокуляции, степень повреждения всех структурных элементов ЦНС; интенсивности вторичных реакций и циркуляторных нарушений); вирусного антигена, его локализации и накопления;

- топику и характер процесса, динамику его развития с оценкой морфологических изменений в продромальном периоде, на высоте клинических проявлений, а при отсутствии последних - в период максимальных изменений, а также в стадии регресса;

- способность штамма вызывать прогредиентную (с замедленным темпом развития морфологических изменений, образованием очагов поражений различной давности, медленным затуханием процесса) и хроническую инфекцию (с длительной персистенцией очагов поражения, с нарастанием морфологических изменений, без затухания процесса).

Сроки изучения экспериментального материала определяют с учетом особенностей инфекции.

Острая инфекция у мелких лабораторных животных (мыши, хомяки), как правило, ограничивается 20 сут., прогредиентная форма - 30-40 сут. У обезьян острая инфекция охватывает период до 30 сут., прогредиентная форма - не менее 3 мес.

Штаммы, вызывающие генерализованные изменения в ЦНС с накоплением вирусного антигена в различных отделах головного и спинного мозга, а также вызывающие хронические формы инфекционного процесса, не должны использоваться для приготовления живых вакцин против нейровирусных инфекций.

5.3.3.1.2. Периферическое введение вируса способом, максимально приближенным к естественному пути заражения и к методу вакцинации.

Учитывается наличие и степень повреждения нервных клеток, других структурных элементов, распространение патологического процесса по цереброспинальной оси и его динамика.

Штаммы, способные при периферическом введении преодолевать гистогематические барьеры, проникать в ЦНС и вызывать поражение нейронов, не должны использоваться для приготовления живых вакцин против нейровирусных инфекций. Первоначальная оценка нейровирулентных свойств вакцинных штаммов при центральном и периферическом введении должна осуществляться на мелких лабораторных животных (не менее двух видов), чувствительных к вирусу.

В последующем полученные данные дополняют результатами экспериментов на обезьянах при непосредственном введении испытуемого штамма в ЦНС одним из пригодных способов с оценкой вышеуказанных для этого теста параметров. Периферический тест на обезьянах проводят только в случаях достаточной их чувствительности к такому методу заражения вирулентным аналогом.

Вопрос о специфической безопасности штамма решается на основании комплекса исследований с учетом результатов патоморфологических данных по двум указанным тестам.

Морфологический метод должен использоваться для оценки стабильности нейровирулентных свойств испытуемого штамма с учетом вышеизложенных параметров в двух указанных тестах.

Аналогичным образом проверяются 3 лабораторные серии препарата.

В дальнейшем периодичность проверки нейровирулентных свойств посевного материала и готовой вакцины определяется стабильностью генетических свойств используемого штамма.

Для проведения гистологических исследований должны применяться общепринятые нейрогистологические методики. Для выявления вирусных включений используют специальные фиксаторы и окраски (по Романовскому-Гимза, по Манну и т.д.). Для установления специфики процесса и идентификации вирусных антигенов используются иммунофлюоресцентные и иммуноферментные методики на криостатных срезах.

Гистологически должны быть исследованы все основные отделы ЦНС (кора различных долей головного мозга, при необходимости - обонятельные доли и пириформная кора; подкорковая область; образования ствола, мозжечка; различные уровни спинного мозга).

5.3.3.2. Оценка специфической безопасности живых вирусных и бактериальных вакцин.

Оценка безопасности других вирусных и бактериальных вакцин осуществляется по тем же принципам, что и живых нейровирусных вакцин, и аналогичным параметрам.

5.3.3.2.1. Оценка специфической активности вакцинного штамма и уровня его аттенуации на адекватной модели. Инфекционный агент вводят способом, обеспечивающим развитие инфекции в чувствительных органах и тканях. Учитывается характер морфологических изменений, их выраженность и развитие в динамике, способность штамма вызывать хронический процесс.

5.3.3.2.2. Введение испытуемого штамма чувствительным животным тем же способом и в той же кратности, которыми будет проводиться вакцинация, или методом, максимально приближенным к естественному пути заражения. Устанавливается способность инфекционного агента преодолевать гистогематические барьеры и вызывать повреждение чувствительных тканей или органов.

Гистологическое исследование проводят с использованием обычных и специальных методов окраски. Идентификацию вирусных и бактериальных антигенов в чувствительных тканях и органах - с помощью МФА или иммуноферментных методик на отпечатках или криостатных срезах.

Вакцинные штаммы, вызывающие генерализованные поражения или хронический процесс, не могут быть использованы для приготовления живых вакцин.

Для штаммов-кандидатов в живые вакцины для ООИ разрешение на ограниченные испытания на людях дается только после лабораторной оценки этих штаммов специальной комиссией, утвержденной Минздравом России (государственные испытания).

Вопрос о специфической безопасности штамма и первых 3-х серий вакцины решается на основе комплексных исследований с учетом данных патоморфологии по двум указанным тестам. Критерии безопасности и уровень допустимых изменений в чувствительных тканях и органах разрабатывают конкретно для каждого вида инфекции с учетом ее особенностей.

Указанный комплекс исследований может быть дополнен или сокращен в зависимости от специфики изучаемого микроорганизма. При сокращении объема исследований должно быть представлено соответствующее обоснование.

Положительные результаты испытания вакцинного штамма позволяют перейти к получению вакцинного препарата. Последний также должен быть изучен по основным показателям, которые включают в НТД.

5.4. Особенности испытания таблетированных
пероральных препаратов *(3)

5.4.1. Общие положения.

5.4.1.1. Таблетированные пероральные МИБП разделяются на оральные, энтеральные и орально-энтеральные. Оральные предназначены для введения в ротовую полость. Энтеральные позволяют вводить действующее начало в начальный отдел тонкой кишки. В случае применения орально-энтерального препарата проникновение действующего вещества происходит в полости рта, глотки и кишечника.

5.4.1.2. Изучение таблетированных пероральных МИЕП проводят в соответствии с рекомендациями, изложенными в РД 42-28-8-89, но с учетом некоторых характерных свойств этой группы препаратов.

5.4.1.3. Лабораторно-экспериментальному изучению подлежат не менее трех лабораторных серий препарата. Результаты испытаний представляют отдельно по каждой серии (см. приложение 1, п.3).

5.4.1.4. При испытании таблетированных пероральных МИБП одним из основных принципов следует считать соответствие способа введения препарата лабораторному животному таковому для человека.

5.4.1.5. При выборе вида лабораторных животных следует, кроме всех остальных требований, учитывать возможность их использования для перорального введения МИБП с лечебно-профилактическими целями.

5.4.1.6. Изучение таблетированных препаратов желательно проводить в сравнении с коммерческим препаратом одного наименования для перорального или парентерального введения или с препаратом, наиболее близким по природе, структуре или назначению. В случае корреляции изучаемых свойств препарата при пероральном и парентеральном введении в дальнейшем при контроле можно ограничиться оценкой при парентеральном введении.

5.4.1.7. Изучение физико-химических свойств таблетированных МИБП проводят в соответствии с требованиями, изложенными в общей статье на таблетки в Государственной Фармакопее XI издания.

5.4.1.8. Принимая во внимание пероральный путь введения таблетированных препаратов, требования стерильности к ним не предъявляют, ограничиваясь испытанием на микробиологическую чистоту, и не проводят испытание пирогенности. Требования к допустимым остаточным количествам общего белка, нуклеиновых кислот и других балластных компонентов в таблетированных препаратах могут быть скорректированы с учетом метода введения.

5.4.2. Особенности способов введения животным при испытании таблетированных пероральных МИБП.

5.4.2.1. Оральные таблетированные препараты, как правило, следует вводить животным в рот естественным физиологическим путем в жидком виде, например, с помощью губки или другого пористого материала, предварительно растерев таблетку в физиологическом растворе. Необходимым условием успешного проникновения действующего начала во внутреннюю среду организма является пребывание таблетки в ротовой полости в течение 2-3 минут.

5.4.2.2. Несоответствие физиологии пищеварения у человека и лабораторных животных, анатомические различия органов пищеварения затрудняют оценку энтеральных МИБП на животных, поэтому при их изучении действующее начало должно быть доставлено непосредственно в тонкий отдел кишечника. Методика изучения зависит от устойчивости действующего начала в рН содержимого желудка.

5.4.2.2.1. В случае, если действующее начало препарата является устойчивым к кислой среде желудка, таблетка может не иметь кислотоустойчивого энтеросолюбильного покрытия, несмотря на то, что действие ее рассчитано на проникновение действующего начала в тонкий кишечник. Такой препарат вводят через рот с помощью мягкой трубки: мелким лабораторным животным - в жидком виде, предварительно растерев таблетку в физиологическом растворе, крупным - в виде таблетки.

5.4.2.2.2. Если действующее начало препарата инактивируется в желудке, таблетку покрывают защитным энтеросолюбильным покрытием. Имеется несколько способов изучения препаратов для энтеральной иммунизации.

5.4.2.2.2.1. Для изучения таблеток размером 4-9 мм в качестве приемлемой экспериментальной модели используют кроликов. Учитывая анатомо-физиологические особенности желудка кролика, из-за которых невозможна полная регулярная эвакуация таблетки крупного размера из желудка в кишечник, вводить ему энтеральную таблетку с покрытием через рот естественным путем нецелесообразно, поскольку защитное энтеросолюбильное покрытие, несмотря на кислотоустойчивость, в результате слишком долгого пребывания в желудке разрушается еще до эвакуации в кишечник, что приводит к инактивации действующего начала. Более приемлемым является пероральное введение таблетки в желудок через мягкую трубку с последующей лапаротомией и принудительной эвакуацией ее из желудка в кишечник.

5.4.2.2.2.2. Обезьяны являются более адекватной человеку экспериментальной моделью при энтеральной иммунизации таблетированными формами с покрытием с использованием физиологических путей (через рот), однако необходимым условием успешной вакцинации является соблюдение необходимых условий адаптации (привыкание к манипуляциям по пероральному введению таблеток), содержания и питания животных. Для обезьян также пригоден метод оперативной энтеральной иммунизации, описанной выше, но при этом наблюдается более выраженная, чем у кроликов, травматичность.

В силу дороговизны и дефицитности, обезьян целесообразно использовать на заключительных этапах исследований и для решения экспериментальных задач, требующих наибольшей адекватности экспериментальной модели (изучение реактогенности и безвредности, хронической токсичности вакцинального процесса и др.).

5.4.2.2.2.3. Для испытания на более мелких лабораторных животных (белые мыши, крысы, морские свинки и др.) используют специально приготовленные экспериментальные серии маленьких таблеток диаметром 2-3 мм или гранулированные формы препарата с защитным энтеросолюбильным покрытием. Таблетки или гранулы вводят через рот с помощью мягкой трубки. Благодаря малому размеру, они легко вводятся в желудок, а затем эвакуируются в кишечник. При введении мелких таблеток и гранул кроликам также нет необходимости оперативного вмешательства. Мелкие таблетки и гранулированные формы целесообразно использовать при изучении хронической токсичности МИБП для энтерального применения,

5.4.2.2.2.4. На первых этапах разработки таблетированных МИБП допустимо пероральное введение жидкого препарата непосредственно в двенадцатиперстную кишку через зонд, который оперативным путем проведен из желудка.

5.4.2.2.2.5. При невозможности введения МИБП энтеральным путем, например, при испытании токсичности готовых таблетированных энтеральных форм на белых мышах и морских свинках, таблетки растирают с физиологическим раствором, суспензию отстаивают с целью осаждения нерастворимых компонентов наполнителя и надосадочную жидкость вводят парентеральным путем. Но в таком случае необходимо помнить, что особенностью таблетированных форм вакцин является присутствие в препарате наполнителей и вспомогательных веществ (ванилин, стеарат кальция, ацетилфталилцеллюлоза, шеллак и др.), а также посторонней микрофлоры, которые, будучи безвредны для организма при попадании через рот и являясь разрешенными для применения в практике здравоохранения, при иных способах введения могут вызвать побочное действие. В этих случаях представляется целесообразным испытание препарата на стадии полуфабриката.

Отмеченные особенности следует учитывать при формулировании требований к пероральным препаратам. Так, при испытании токсичности при подкожном введении элюатов таблеток морским свинкам требования к испытуемому препарату можно ограничить отсутствием гибели среди животных и абсцессов в месте введения в течение 5 суток.