Законодательная база Российской Федерации

"ГОСУДАРСТВЕННЫЕ ИСПЫТАНИЯ И РЕГИСТРАЦИЯ НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ. САНИТАРНЫЕ ПРАВИЛА. СП 3.3.2.561-96" (утв. Постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 31.10.96 N 33)

На стадиях доклинических и клинических испытаний кроме описанных выше методов рекомендуется проводить дополнительные исследования состояния иммунной системы, которые не являются обязательными и выполняются в зависимости от результатов иммунологических исследований первого уровня. Дополнительные исследования включают: реакцию спонтанной бластгрансформации лимфоцитов, реакцию бласттрансформации лимфоцитов под влиянием Ти В-митогенов (ФГА, Кон А, ЛПС), определение функциональной активности регуляторных Т-лимфоцитов (Т-хелперов, Т-супрессоров), реакцию торможения миграции макрофагов и лейкоцитов, пассивную кожную анафилаксию в опытах на морских свинках и мышах, индукцию замедленной гиперчувствительности и экспериментального аллергического энцефаломиелита на животных, определение уровня различных цитокинов, оценку клеточного иммунитета у людей по кожным реакциям замедленной гиперчувствительности на РРД, кандидин, трихофитин и пр. Для проведения дополнительных исследований можно пользоваться методиками, описанными в различных методических руководствах по иммунологии.

*(1) Кровь барана, взятую в консервант крови, можно хранить до 10 сут. при 6-8°С.

*(2) Приготовление раствора трипанового синего. Для приготовления 0,5%-ного раствора 500 мг красителя растворяют в 100 мл горячего (80-90°С) 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Раствор перемешивают 10 мин на магнитной мешалке и фильтруют через фильтровальную бумагу. Готовый раствор хранят в плотно закрытом сосуде при температуре 10-20°С. Непосредственно перед употреблением раствор красителя фильтруют через тонкий слой ваты, чтобы избавиться от осадка.

*(3) Приготовление гепарина. Сухой гепарин растворяют в дистиллированной воде в объеме, указанном на этикетке, раствор стерилизуют фильтрованием через фильтры Миллипор и хранят при 6-8 градусов С в течение одного цикла исследований. Из основного раствора гепарина готовят его рабочий раствор на среде 199 с таким расчетом, чтобы в 0,5 мл содержалось 250 ед. активности.

*(4) Приготовление 0,9%-ного раствора хлорида натрия буферного (рН 7,2). К 7,0 хлорида натрия добавляют 2,0 г двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,3 г однозамещенного фосфорнокислого калия, доводят до 1000 мл ТДВ, рН 7,2.

*(5) Приготовление смеси фиколл-верографина (плотность 1,077). Смесь готовят на тридистиллированной автоклавированной воде (ТДВ): а) Из 76%-ного раствора верографина готовят 33,9%-ный раствор (плотность 1,200); к 33,9 мл 76%-ного верографина добавляют 42,1 мл ТДВ; б) 9%-ный раствор фиколла (плотность 1,025): к 10,8 г фиколла добавляют 109,2 мл ТДВ (подогретой до 30-40 грудусов С); в) соединяют 7 частей раствора верографина и 16 частей раствора фиколла: к 52,5 мл верографина добавляют 120 мл фиколла. Плотность смеси измеряют ареометром, плотность смеси должна быть 1,077. Смесь хранят в темном флаконе в холодильнике при 6-8°С две недели.

*(6) кЕ/л (система СИ) = Е/мл

*(7) Силиконирование посуды. Чистые пробирки ополаскивают силиконом, помещают в фильтровальную бумагу вверх дном для того, чтобы стекли остатки силикона из пробирок, выдерживают в таких условиях в течение 1 ч, затем помещают их в сушильный шкаф на 1,5 ч при температуре 120-140°С, затем промывают пробирки дистиллированной водой и вновь выдерживают в сушильном шкафу в указанном режиме. Работу по силиконированию посуды проводят в лабораторном химическом шкафу с вытяжкой.

*(8) Приготовление краски метиловый-зеленый пиронин. Предварительно готовят растворы "а" и "б", перед использованием смешивают указанные растворы в соотношении 1:1. Раствор "а" состоит из смеси следующего состава: 17,5 мл 5%-ного водного раствора пиронина, 10 мл 2%-ного раствора метилового зеленого (метиловый зеленый должен быть предварительно промыт хлороформом и высушен на воздухе), 250 мл дистиллированной воды. Раствор "б" - ацетатный буферный раствор в концентрации 0,2 моль/м, рН 4,8.

Приготовление ацетатного буферного раствора 0,2 М рН 4,8. К 120 мл раствора ацетата натрия в концентрации 0,1 моль/м3 (16,3 г ацетата натрия на 1 л дистиллированной воды) доливают около 80 мл раствора уксусной кислоты той же концентрации (4,61 мл ледяной уксусной кислоты на 1 л дистиллированной воды), доводят рН раствора до 4,8.